[發明專利]豬易感相關致病菌檢測的LAMP引物組及基于此的試劑盒和LAMP芯片和應用

有效

• 申請號: 202110965791.1
• 申請日: 2021-08-23
• 公開（公告）號: CN113637781B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 劉雪蘭;李郁;湯杰;李槿年;許發芝;陳芳芳
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/6837;C12Q1/04;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/21;C12R1/42;C12R1/46;C12R1/01
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.豬易感相關致病菌檢測的LAMP引物組，所述豬易感相關致病菌包括：豬胸膜肺炎放線桿菌、副豬嗜血桿菌、豬霍亂沙門氏菌、豬支氣管敗血波氏桿菌、多殺性巴氏桿菌、豬鏈球菌和豬丹毒；所述LAMP引物組包括豬胸膜肺炎放線桿菌引物組、副豬嗜血桿菌引物組、豬霍亂沙門氏菌引物組、豬支氣管敗血波氏桿菌引物組、多殺性巴氏桿菌引物組、豬鏈球菌引物組和豬丹毒引物組；

所述豬胸膜肺炎放線桿菌引物組包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的正向內引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的反向內引物BIP；

所述副豬嗜血桿菌引物組包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的正向內引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的反向內引物BIP；

所述豬霍亂沙門氏菌引物組包括核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的正向內引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的反向內引物BIP；

所述豬支氣管敗血波氏桿菌引物組包括核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示的正向內引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示的反向內引物BIP；

所述多殺性巴氏桿菌引物組包括核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示的正向內引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示的反向內引物BIP；

所述豬鏈球菌引物組包括核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示的正向內引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示的反向內引物BIP；

所述豬丹毒桿菌引物組包括核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示的正向外引物F3，核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示的反向外引物B3，核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示的正向內引物FIP和核苷酸序列如SEQ ID NO.28所示的反向內引物BIP。

2.一種豬易感相關致病菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的LAMP引物組和反應液。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述反應液包括Bst DNA聚合酶、10×Isothermal Amplification反應緩沖液、BSA-A、dNTP、MgSO₄水溶液和熒光染料。

4.一種檢測豬易感相關致病菌的LAMP芯片，其特征在于，所述芯片包括權利要求1所述的LAMP引物組、反應液和芯片。

5.根據權利要求4所述的LAMP芯片，其特征在于，所述LAMP引物組中任一病菌對應的外引物對和內引物對的摩爾比均為1:8。

6.根據權利要求4所述的LAMP芯片，其特征在于，所述反應液包括Bst DNA聚合酶、10×Isothermal Amplification反應緩沖液、BSA-A、dNTP、MgSO₄水溶液和熒光染料。

7.根據權利要求4所述的LAMP芯片，其特征在于，所述芯片包括恒溫擴增微流控芯片。

8.根據權利要求4所述的LAMP芯片，其特征在于，所述LAMP芯片的擴增反應池中包括：副豬嗜血桿菌反應池、豬霍亂沙門氏菌反應池、豬支氣管敗血波氏桿菌反應池、多殺性巴氏桿菌反應池、豬鏈球菌反應池、豬丹毒反應池、豬胸膜肺炎放線桿菌反應池和陰性對照組反應池。