[發明專利]一種基于生物酶法合成熊去氧膽酸的純化方法

在審

• 申請號: 202110965271.0
• 申請日: 2021-08-23
• 公開（公告）號: CN113666982A
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發明（設計）人: 傅榮昭;謝紹慶;劉一平
• 申請（專利權）人: 江西邦泰綠色生物合成生態產業園發展有限公司
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物制藥領域，具體涉及一種基于生物酶法合成熊去氧膽酸的純化方法，有(1)熊去氧膽酸粗提取；(2)熊去氧膽酸三乙胺鹽的制備；(3)熊去氧膽酸三乙胺鹽的水解三個步驟，采用硅藻土和氯化鈣混合物粗提取后在與三乙胺成鹽，水解得到熊去氧膽酸，采用該技術得到的熊去氧膽酸純化收率可以達到85％以上，得到的純化后的熊去氧膽酸純化在99.9％以上。綜合成本較低，符合工業生產原則。

技術領域

本發明屬于生物制藥領域，具體涉及一種基于生物酶法合成熊去氧膽酸的純化方法。

背景技術

熊去氧膽酸(Ursodeoxycholic acid，UDCA)化學名稱為3α,7β-二羥基-5β-膽甾烷-24-酸，與鵝去氧膽酸的分子式相同，立體結構不同，是甾體類化合物，CAS 登錄號：83-39-4,分子式：C₂₄H₄₀O，分子量392.57。主要用于不宜手術治療的膽固醇型膽結石，尤其是膽囊功能基本正常、結石直徑在15mm以下、透X線、非鈣化型的浮動膽固醇結石的治愈率高。對中毒性肝炎、膽囊炎、原發性硬化性膽管炎、原發性膽汁淤積性肝硬化也有一定的治療效果。提高α-干擾素治療慢性丙型肝炎的療效，隨著對熊去氧膽酸的深入研究，熊去氧膽酸的臨床應用越來越廣泛，市場需求量越來越大。

熊去氧膽酸天然來源是取活熊膽或熊膽汁，方法操作較為復雜，并且違背人文道義和動物保護原則，為此熊去氧膽酸人工合成研究具有重要價值和意義，目前熊去氧膽酸有化學合成和生物酶催化合成，但不管化學法還是生物酶催化大部分都是由鵝去氧膽酸(CDCA)為原料，經過氧化得到7-酮基石膽酸中間體，然后再還原得到UDCA，生物酶催化合成路線如下：

其中鵝去氧膽酸在氧化為7-酮基石膽(7K)和還原成熊去氧膽酸時都會有部分原料未反應完，并且CDCA原料當中也攜帶其他膽酸類雜質，如膽酸、別膽酸和異鵝去氧膽酸，都會殘留到熊去氧膽酸成品，影響熊去氧膽酸質量，因此通過純化分離雜質對于提高熊去氧膽酸質量至關重要。

有專利采用乙酸乙酯選擇性地從含有熊去氧膽酸和鵝去氧膽酸的混合物中溶解除去鵝去氧膽酸等雜質。但是由于兩種膽酸在乙酸乙酯中的溶解度都不大, 所以實際生產大量的乙酸乙酯才能將鵝去氧膽酸從熊去氧膽酸混合物中充分分離出來。總體來說,以乙酸乙酯作為溶劑，單位溶劑的生產能力較低,溶劑用量大，后續的溶劑回收步驟能耗巨大。

發明內容

基于背景技術中提到的問題，本發明擬提供一種收率在8.5成以上，得到純化后的熊去氧膽酸純化在99.9％以上的工藝。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種基于生物酶法合成熊去氧膽酸的純化方法，由以下步驟組成：

(1)熊去氧膽酸粗提取：

取生物酶反應后的熊去氧膽酸與蛋白酶的混合物投入反應瓶中，加入甲醇，攪拌升溫至50～60℃，維持溫度1～2h，加入氯化鈣和硅藻土混合物，50～60℃下攪拌1～2h，過濾，用熱的甲醇洗濾餅，將濾液濃縮，然后滴加1倍體積的水，在 50～60℃維持1～2h，然后降溫至5～10℃，過濾，將濕品烘干，得到熊去氧膽酸粗品；

(2)熊去氧膽酸三乙胺鹽的制備：

將熊去氧膽酸粗品加入到丙酮中，攪拌升溫至40～50℃，維持溫度1～2h，然后緩慢加入等物質的量的三乙胺，升溫至55℃～60℃回流反應1～2h，然后緩慢將至5～10℃，攪拌2h，過濾，冷丙酮洗滌濾餅，得到濕品熊去氧膽酸三乙胺鹽；

(3)熊去氧膽酸三乙胺鹽的水解：