[發明專利]檢測半滑舌鰨TLR2和NF-κB基因表達水平的引物及方法在審
| 申請號： | 202110962603.X | 申請日： | 2021-08-20 |
| 公開（公告）號： | CN113444781A | 公開（公告）日： | 2021-09-28 |
| 發明（設計）人： | 汪笑宇;邵蓬;湯青平;賈磊;王群山;劉克明;何曉旭 | 申請（專利權）人： | 天津市水產研究所;天津農學院 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 天津盛理知識產權代理有限公司 12209 | 代理人： | 韓曉梅 |
| 地址： | 300241 *** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 檢測 舌鰨 tlr2 nf 基因 表達 水平 引物 方法 | ||
1.一種用于非診斷目的檢測半滑舌鰨TLR2、NF-κB基因表達水平的實時熒光定量PCR的引物，其特征在于：所述引物包括半滑舌鰨TLR2和NF-κB基因的特異性上、下游引物；
其中，半滑舌鰨TLR2基因的特異性上、下游引物序列如下：
TLR2 F：SEQ ID NO.1；
TLR2 R：SEQ ID NO.2；
半滑舌鰨NF-κB基因的特異性上、下游引物序列如下：
NF-κB F：SEQ ID NO.3；
NF-κB R：SEQ ID NO.4。
2.一種利用如權利要求1所述的引物的用于非診斷目的檢測半滑舌鰨TLR2和NF-κB基因表達水平的實時熒光定量PCR的方法，其特征在于：步驟如下：
(1)逆轉錄合成得到半滑舌鰨組織cDNA第一鏈；
(2)分別以TLR2 F和TLR2 R、NF-κB F和NF-κB R為引物，用實時熒光定量PCR法檢測TLR2和NF-κB基因表達水平。
3.根據權利要求2所述的用于非診斷目的檢測半滑舌鰨TLR2和NF-κB基因表達水平的實時熒光定量PCR的方法，其特征在于：所述步驟(1)具體為：
以半滑舌鰨組織的總RNA為模板，逆轉錄合成得到半滑舌鰨組織cDNA第一鏈。
4.根據權利要求2所述的用于非診斷目的檢測半滑舌鰨TLR2和NF-κB基因表達水平的實時熒光定量PCR的方法，其特征在于：所述步驟(2)中實時熒光定量PCR法的PCR擴增體系如下：
TB Green Premix Ex Taq II 2×10μL，上、下游引物各0.8μL，cDNA模板2μL，去離子水6.4μL，總計20μL，上、下游引物終濃度均為0.4μM。
5.根據權利要求2所述的用于非診斷目的檢測半滑舌鰨TLR2和NF-κB基因表達水平的實時熒光定量PCR的方法，其特征在于：所述步驟(2)中實時熒光定量PCR法的PCR反應條件為：
95℃預變性30s；95℃變性5s，60℃退火30s，運行40個循環；95℃5s，60℃1min，運行1個循環；50℃30s降溫。
6.根據權利要求2至5任一項所述的用于非診斷目的檢測半滑舌鰨TLR2和NF-κB基因表達水平的實時熒光定量PCR的方法，其特征在于：所述步驟(2)中采用2-ΔΔCT相對定量方法計算不同樣品的TLR2和NF-κB基因表達。
7.一種包含如權利要求2至6任一項所述的方法的用于檢測半滑舌鰨TLR2和NF-κB基因表達水平的試劑盒。
8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中包括熒光染料，熒光染料為SYBR Green熒光染料。
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