[發明專利]一種乳酸乳球菌的快速活化方法及其在酸奶中的應用

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• 申請號: 202110961598.0
• 申請日: 2021-08-20
• 公開（公告）號: CN113621542A
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 殷世清;張甲慶;朱永真;徐靖洋;張鳳龍;李艷琪
• 申請（專利權）人: 江蘇漢肽生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;A23C9/123;A23C9/12;C12R1/01
• 代理公司: 淄博川誠知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 37275
• 代理人: 高鵬飛

本發明公開了一種乳酸乳球菌的快速活化方法，所述活化方式包括：S101：菌種活化，從?80℃冰箱中取出乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)LL47原始出發菌株，于冰上解凍，接種于M17培養基中，于30℃、180rpm條件下培養16h，鏡檢合格后再接入到M17培養基中，30℃條件下培養16h，經過2代液體培養；S102：菌種培養；S103：菌種保藏，重懸混勻，轉入凍存管中，放入?80℃溫度下保存，得到凍存種子，以備使用；S104：活力評價；本發明中的酸奶發酵劑培養時間縮短4h，接種發酵后酸奶凝乳時間縮短3.5h，下罐時間縮短7.39h，產品有效活菌數提高11.67倍，產品滴定酸度提升7.18°T，節約生產成本19.84％，大大降低了酸奶貨架期的染菌風險。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，具體為一種乳酸乳球菌的快速活化方法及其在酸奶中的應用。

背景技術

酸奶發酵劑是制作酸奶所用的特定的微生物培養材料，可分為液體酸奶發酵劑、冷凍酸奶發酵劑和直投式酸奶發酵劑；在目前乳制品行業，多采用直投式發酵劑，其保證了酸奶生產的標準化、統一化、規范化，適用于大批量和常規菌種生產。

對于小批量的自有菌種，由于菌種抗冷凍和抗干燥能力差，且用量較小，不適合制作成直投式發酵劑，多數中小乳企選擇液體發酵劑；液體發酵劑常用牛奶進行攪拌發酵，發酵周期長達12～16h，菌種活力較差，染菌風險高；故需要研發一種穩定、高活力的液體酸奶發酵劑制備工藝。

發明內容

本發明的目的在于提供一種乳酸乳球菌的快速活化方法及其在酸奶中的應用，以解決液體發酵劑穩定性差，活菌量低，活力差的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種乳酸乳球菌的快速活化方法，所述活化方式包括：

S101：菌種活化，從-80℃冰箱中取出乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)LL47原始出發菌株，于冰上解凍，接種于M17培養基中，于30℃、180rpm條件下培養16h，鏡檢合格后再接入到M17培養基中，30℃條件下培養16h，經過2代液體培養；

S102：菌種培養，將步驟S101中的復壯完成的液體菌種，按照1％的接種量接種到M17培養基中，于30℃、180rpm條件下培養10～16h，獲得發酵菌種；

S103：菌種保藏，將步驟S102中獲得發酵菌種，經10000rpm、2min離心獲得菌泥；向菌泥中加入發酵體積量20～40％的M17培養基和10～30％的甘油，重懸混勻，轉入凍存管中，放入-80℃溫度下保存，得到凍存種子，以備使用；

S104：活力評價，將步驟S103中的凍存種子，解凍后按1％的接種量接種到M17培養基中，于30℃、180rpm條件下培養16h，每隔2h，測定一次OD₆₀₀，選取OD₆₀₀增長最快工藝，作為最佳菌種保存方式。

其中，需要說明的是，本發明所采用的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)LL47，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC NO.22892，保藏日期為2021年7月13日。

一種乳酸乳球菌在酸奶中的應用，所述應用包括：

步驟1：酸奶發酵劑制作，取乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)LL47凍存種子，按1％的接種量接種到發酵培養基中，于30℃、180rpm條件下培養6～10h，完成酸奶發酵劑制作；

步驟2：酸奶發酵，將步驟1中的酸奶發酵劑，按照5％的接種量，接種到牛奶中，先于30℃、100rpm條件下培養1h，后于30℃條件下，靜置發酵，得到酸奶。