[發明專利]一種花馬雜交鹿鹿角盤活性肽及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110960912.3
• 申請日: 2021-08-20
• 公開（公告）號: CN113603762B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 胡薇;汪樹理;周怡君
• 申請（專利權）人: 吉林農業大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/16;C07K1/30;C07K1/20;C07K1/36;C07K1/14;A61K38/17;A61P31/04
• 代理公司: 沈陽一諾君科知識產權代理事務所(普通合伙) 21266
• 代理人: 劉麗娟

本發明公開了一種花馬雜交鹿鹿角盤活性肽及其制備方法和應用，以鹿角盤為原料采用酸提醇沉得蛋白粗提物，之后通過Sephadex?G?25凝膠層析柱和反相高效液相色譜等方法分離純化出花馬雜交鹿鹿角盤活性肽SAPBP。本發明制得的花馬雜交鹿鹿角盤活性肽通過對菌體細胞膜和細胞璧的破壞達到對細菌的抑制效果，為新型抗菌藥物的研發提供理論依據。

技術領域

本發明涉及活性肽制備領域，特別是一種花馬雜交鹿鹿角盤活性肽及其制備方法和應用。

背景技術

早在20世紀50年代，我國就成功地進行了梅花鹿和馬鹿的雜交，雜交鹿表現出明顯的雜交優勢，普遍適應性強、耐粗飼、抗病力強、性成熟早、生長發育快。目前花馬雜交鹿在吉林省的存欄數逐年增加，也越來越受到科研工作者的重視，其產品有著較高的藥用價值和良好的應用前景。鹿角盤是雄鹿鋸茸后于第二年脫落的圓盤骨化物質。早在《神農本草經》中就有記載，鹿角盤具有“溫補肝腎、活血化瘀、乳癰初起、消炎腫痛”等功效。鹿角盤含有蛋白質類、脂類、多肽類、糖類、氨基酸(含機體不能合成的必需氨基酸)以及無機元素等，其中蛋白質類含量尤為豐富。鹿角盤的藥理活性主要集中于抗炎鎮痛、抗疲勞、抗骨質疏松、抑菌、抗氧化、增強造血等。

近年來，人們愈發重視鹿角盤的研究利用，對于鹿角盤的化學成分有了較為全面的概述和研究。越來越多的實驗研究和實踐也充分證明，鹿角盤的很多成分具有顯著的藥理作用。為了更好地對鹿角盤進行研究，結合鹿角盤的生物學特點，對已發現的活性成分進行結構鑒定和功能性研究，尋求科學的理論依據，這不僅會讓鹿角盤更好地應用于臨床或人們的日常保健中，而且對鹿產品研究領域具有重要的意義和價值。

發明內容

本發明的目的是要為了解決現有技術中存在的不足，提供一種花馬雜交鹿鹿角盤活性肽及其制備方法和應用。

為達到上述目的，本發明是按照以下技術方案實施的：

本發明的第一個目的是要提供一種花馬雜交鹿鹿角盤活性肽的制備方法，包括以下步驟：

S1、取花馬雜交鹿鹿角盤磨碎成粉末，得到鹿角盤粉；

S2、配制pH為3.6的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液于4℃中充分預冷，將醋酸-醋酸鈉緩沖溶液與鹿角盤粉按重量比5：1的比例混合，充分攪拌后離心取上清液，記為溶液A；

S3、向溶液A中加入終濃度為55％的乙醇，于4℃下靜置后離心取上清液，記為溶液B；

S4、將溶液B用旋轉蒸發儀于40℃下蒸發至合適體積，冷凍干燥得總蛋白粗提物；

S5、將總蛋白粗提物用去離子水溶解，然后用Sephadex?G-25層析柱除鹽，除鹽條件為：上樣量為10ml；上樣濃度為100mg/ml，洗脫液為去離子水，洗脫流速為1ml/min，檢測波長為280nm，收集各組分，冷凍干燥后，獲得除鹽蛋白；用BCA法檢測除鹽蛋白中的蛋白含量，用SDS-PAGE凝膠電泳檢測蛋白分子量的分布：其大分子蛋白主要集中在116k?Da～29.0kDa之間，小分子量蛋白主要集中在20.1kDa以下，其中以20.1kDa和6.5kDa的蛋白尤為明顯；

S6、對除鹽蛋白進行凝膠過濾色譜分析：將50mg的除鹽蛋白溶于2ml的超純水中，配成終濃度為25mg/ml的上樣樣品，用Sephadex?G-25層析柱以0.5ml/min的流速進行洗脫，洗脫液為去離子水，檢測波長為280nm，收集兩個組分S1和S2，冷凍干燥后于-20℃保存，用SDS-PAGE凝膠電泳檢測兩個組分S1和S2的分子量分布：組分S1主要為116kDa-29kDa的大分子蛋白，組分S2主要在20kDa和6.5kDa有明顯的兩種蛋白；