[發(fā)明專(zhuān)利]超氧化物歧化酶在制備LCDA中的應(yīng)用及過(guò)表達(dá)其的基因工程菌

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110948679.7
• 申請(qǐng)日: 2021-08-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115710584A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-02-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張明明;劉修才
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海凱賽生物技術(shù)股份有限公司;CIBT美國(guó)公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/53
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/53;C12N9/02;C12N15/81;C12N1/19;C12P7/6409;C12R1/72;C12R1/74
• 代理公司: 上海弼興律師事務(wù)所 31283
• 代理人: 王衛(wèi)彬;黃益澍

1.超氧化物歧化酶或超氧化物歧化酶基因在微生物發(fā)酵生產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸中的應(yīng)用。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述超氧化物歧化酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，或與SEQ ID NO:9具有至少約95％的同一性的序列；

和/或，所述微生物為棒狀桿菌(Corynebacterium)、白地霉(Geotrichum candidum)、假絲酵母屬(Candida)、畢赤酵母屬(Pichia)、紅酵母屬(Rhodotroula)、酵母屬(Saccharomyces)或耶氏酵母屬(Yarrowia)，優(yōu)選為維斯假絲酵母(Candida viswanathii)或熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)，更優(yōu)選為菌種保藏號(hào)CCTCC NO:M 2020048的維斯假絲酵母或菌種保藏號(hào)CCTCC NO:M 2021824的維斯假絲酵母。

3.一種包含超氧化物歧化酶基因的表達(dá)元件，其特征在于，所述表達(dá)元件為將超氧化物歧化酶基因構(gòu)建到質(zhì)粒上得到的重組表達(dá)載體，或?yàn)榘ǔ趸锲缁富虻闹亟M表達(dá)片段；所述超氧化物歧化酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，或與SEQ ID NO:9具有至少約95％的同一性的序列；

優(yōu)選地，所述質(zhì)粒為pCIB2；和/或，所述重組表達(dá)片段通過(guò)如SEQ ID NO:3與SEQ IDNO:4所示的引物序列擴(kuò)增所述超氧化物歧化酶基因獲得。

4.一種基因工程菌，其特征在于，其包括核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示的超氧化物歧化酶基因，所述基因工程菌的出發(fā)菌為棒狀桿菌(Corynebacterium)、白地霉(Geotrichumcandidum)、假絲酵母屬(Candida)、畢赤酵母屬(Pichia)、紅酵母屬(Rhodotroula)、酵母屬(Saccharomyces)或耶氏酵母屬(Yarrowia)，優(yōu)選為維斯假絲酵母(Candida viswanathii)或熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)，更優(yōu)選為菌種保藏號(hào)CCTCC NO:M2020048的維斯假絲酵母或菌種保藏號(hào)CCTCC NO:M 2021824的維斯假絲酵母。

5.如權(quán)利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌包括如權(quán)利要求3所述的表達(dá)元件中的重組表達(dá)片段；優(yōu)選地，所述重組表達(dá)片段導(dǎo)入所述出發(fā)菌后，通過(guò)同源重組方式整合在所述出發(fā)菌的基因組上；更優(yōu)選地，所述整合的位點(diǎn)為int1基因或其同源基因。

6.如權(quán)利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述過(guò)氧化物酶基因利用非整合方式導(dǎo)入所述基因工程菌；

優(yōu)選地，所述非整合方式為：將包含超氧化物歧化酶基因的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化所述出發(fā)菌；更優(yōu)選地，所述重組表達(dá)載體的出發(fā)質(zhì)粒為pCIB2。

7.一種制備如權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所述的基因工程菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：將核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示的超氧化物歧化酶基因?qū)氚魻顥U菌(Corynebacterium)、白地霉(Geotrichum candidum)、假絲酵母屬(Candida)、畢赤酵母屬(Pichia)、紅酵母屬(Rhodotroula)、酵母屬(Saccharomyces)或耶氏酵母屬(Yarrowia)，優(yōu)選為維斯假絲酵母(Candida viswanathii)或熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)，更優(yōu)選為菌種保藏號(hào)CCTCC NO:M 2020048的維斯假絲酵母或菌種保藏號(hào)CCTCC NO:M 2021824的維斯假絲酵母。