[發明專利]一種超微量全長RNA測序文庫的構建方法在審
| 申請號： | 202110936057.2 | 申請日： | 2021-08-16 |
| 公開（公告）號： | CN113789364A | 公開（公告）日： | 2021-12-14 |
| 發明（設計）人： | 葛芹玉;施華娟;賈二騰;趙祥偉;劉芝余;白云飛 | 申請（專利權）人： | 東南大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6806 | 分類號： | C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 王艷 |
| 地址： | 211102 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 微量 全長 rna 序文 構建 方法 | ||
1.一種超微量全長RNA測序文庫的構建方法，其特征在于，所述構建方法主要包括以下步驟：
1）獲得細胞或者亞細胞樣本中的超微量的總RNA，構建包含rRNA序列信息的cDNA文庫；
2）對步驟1）中獲得的cDNA文庫進行擴增；
3）根據細胞或者亞細胞相應物種的rRNA序列，設計特異性的sgRNA序列組合，所述的sgRNA序列組合包括SEQ ID No.1- SEQ ID No.58；
4）將sgRNA序列組合配置的溶液與步驟2）擴增的cDNA文庫進行混合，利用CRISPR/Cas9系統在Cas9蛋白作用下進行特異性的切割，獲得不包含rRNA信息的cDNA文庫。
2.根據權利要求1所述的超微量全長RNA測序文庫構建方法，其特征在于，所述細胞或者亞細胞樣本中的超微量的總RNA的起始量為0.5-500 pg。
3.根據權利要求1所述的超微量全長RNA測序文庫構建方法，其特征在于，步驟2）中擴增為PCR擴增或等溫擴增。
4.根據權利要求1所述的超微量全長RNA測序文庫構建方法，其特征在于，步驟4）中配置rRNA去除反應體系，37 ℃孵育0.5-2 h。
5.根據權利要求1所述的超微量全長RNA測序文庫構建方法，其特征在于，步驟4）中Cas9蛋白的濃度為10 nM-2 μM。
6.根據權利要求1所述的超微量全長RNA測序文庫構建方法，其特征在于，步驟4）中所述sgRNA序列組合在配置的溶液中的濃度為0.1-1 μM。
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