[發明專利]注射衣霉素誘導急性肝損傷小鼠模型的構建方法

在審

• 申請號: 202110933719.0
• 申請日: 2021-08-15
• 公開（公告）號: CN113647359A
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發明（設計）人: 楊蘭香;黃昭;郭豪杰;程旺開;熊冉;張佳佳
• 申請（專利權）人: 蕪湖職業技術學院
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;A61D7/00
• 代理公司: 江蘇海越律師事務所 32402
• 代理人: 唐小紅

本發明公開了注射衣霉素誘導急性肝損傷小鼠模型的構建方法，將配置好的濃度為0.1μg/μl衣霉素(TM)溶液通過腹腔注射的給藥方式注射到小鼠體內，12h后采用頸椎脫臼方法處死小鼠并收集血液、肝臟組織進行形態、病理及生化指標分析。該方法不僅操作簡便、建模周期短、建模成功率高、生物利用率高，而且為建立急性肝損傷模型小鼠提供了新思路，同時為研究肝損傷及病情進展的發病機制提供實驗工具，為臨床肝病的預防、治療提供理論基礎。

技術領域

本發明屬于動物模型構建技術領域，具體涉及一種腹腔注射誘導急性肝損傷小鼠模型的構建方法。

背景技術

肝病是威脅健康的重大疾病之一，其患病率和致死率均很高。長期服用藥物、患有炎癥性肝病(如病毒性肝炎、脂肪型肝炎或酒精性肝炎)、生活飲食習慣不健康(長期的熬夜、酗酒、工作壓力大)等原因都會造成一定程度的肝損傷，長期的肝損傷得不到有效治療便會發展為肝硬化、肝癌甚至死亡。而小鼠作為常規的實驗動物，因此建立急性肝損傷的小鼠模型在肝病致病機理研究及藥物研發中非常重要。

目前常用的急性肝損傷小鼠模型有四氯化碳(CCl4)、α-萘異硫氰酸酯(ANIT)、3，5-二乙氧基羰基-1，4-二氫-2，4，6-三甲基吡啶 (DDC)、脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(D-GaLN)、對乙酰氨基酚(APAP) 等誘發的肝損傷模型。不同急性肝損傷動物模型有不同的生化及肝臟病理特點，每一種動物模型都有其優勢與不足，尚沒有完全理想的急性肝損傷動物模型。另外，現有技術中公開了一種新型的內質網應激型肝損傷小鼠造模方法，例如公開號CN103735561A的專利公開了采用衣霉素二甲基亞砜溶液作為內質網應激誘導劑給小鼠灌胃，所述方法雖然能在給藥8～48h后誘導急性肝損傷的發生，但是該方法采用的是灌胃給藥的方法，內質網應激誘導劑經胃腸道吸收，會存在胃腸道首過代謝從而導致生物利用率降低的現象。

發明內容

本發明目的在于提供一種新型的腹腔注射衣霉素溶液從而誘導急性肝損傷小鼠模型的構建方法，所述方法不僅操作簡便、建模周期短、建模成功率高，而且小鼠生物利用率高。技術方案包括以下步驟：

1、衣霉素溶液的配制；

①150mM葡萄糖溶液的配制：精密稱取810.72mg葡萄糖溶于30ml 滅菌水中，震蕩溶解。

②0.1μg/μl衣霉素(TM)溶液的配制：精密稱取1mg衣霉素粉末溶解于100μl二甲亞砜(DMSO)中，再加入10ml的150mM葡萄糖溶液，震蕩溶解，4℃保存。

③1％DMSO對照液的配制：取100μl二甲亞砜(DMSO)溶液加入到10ml的150mM葡萄糖溶液，震蕩溶解，4℃保存。

④將7周齡C57BL/6小鼠按體重大小隨機分成對照組和實驗組兩組，每組12只，實驗組開始腹腔注射步驟②中配制的TM溶液(100μl/10g)，與此同時對照組腹腔注射步驟③中配制的 1％DMSO對照液(100μl/10g)，12h后處死取材。

⑤觀察肝臟形態、病理圖并檢測肝損傷相關的生化指標。

有益效果

本發明是腹腔注射衣霉素溶液從而誘導急性肝損傷小鼠模型的構建方法，由于采用的是腹腔注射的方法，該方法較好的避免了胃腸道首過代謝現象，從而達到用較低劑量的衣霉素(1μg/g)、且在短周期內(12h)即可完成急性肝損傷模型的建立，為建立急性肝損傷小鼠模型提供了新思路，同時為研究肝損傷及病情進展的發病機制提供實驗工具，為臨床肝病的預防、治療提供理論基礎。

具體實施方式

本發明是腹腔注射衣霉素溶液從而誘導急性肝損傷小鼠模型的構建方法，具體實施方式包括：

①溶液的配制：

150mM葡萄糖溶液的配制：用分析天平精密稱取810.72mg葡萄糖粉末于50ml無菌EP管里，并向EP管加入30ml滅菌水，震蕩溶解。