[發(fā)明專利]抗條銹病基因YrAS2388R的KASP分子標(biāo)記及引物、試劑盒和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110932690.4
• 申請(qǐng)日: 2021-08-13
• 公開（公告）號(hào): CN113637790B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃林;胡燕靈;王芳;劉登才;伍碧華;張連全;袁中偉;甯順腙;郝明;姜博
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京眾合誠成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

本發(fā)明公開了一種抗條銹病基因YrAS2388R的KASP分子標(biāo)記及引物、試劑盒和應(yīng)用，該KASP分子標(biāo)記的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本發(fā)明基于KASP原理以及功能型YrAS2388R和非功能型YrAS2388S基因外顯子區(qū)內(nèi)的單堿基差異設(shè)計(jì)KASP分子標(biāo)記，本發(fā)明的KASP分子標(biāo)記能區(qū)分YrAS2388R純合抗病和雜合抗病位點(diǎn)，能實(shí)現(xiàn)對(duì)節(jié)節(jié)麥抗條銹病基因YrAS2388的高通量檢測，能夠?qū)rAS2388R位點(diǎn)分子標(biāo)記輔助育種高效、準(zhǔn)確選擇。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種抗條銹病基因分子標(biāo)記，具體涉及一種抗條銹病基因YrAS2388R的KASP分子標(biāo)記及引物、試劑盒和應(yīng)用。

背景技術(shù)

小麥條銹病是由條形柄銹菌小麥專化型(Puccinia?striiformis?f.sp.tritici)引起的世界性真菌病害。條銹病在一般流行年份可導(dǎo)致5～25％的小麥產(chǎn)量損失，大流行年份甚至絕收。實(shí)踐證明，培育推廣抗條銹病品種是防治條銹病最經(jīng)濟(jì)、有效、安全且環(huán)保的措施。

傳統(tǒng)的小麥抗病品種培育基于對(duì)植株抗性表型選擇，具有耗費(fèi)時(shí)間長，抗性鑒定結(jié)果易受環(huán)境條件的影響，準(zhǔn)確性差和效率低。利用分子標(biāo)記輔助選擇育種，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)抗病基因型的直接選擇，簡單快速；不僅能夠降低育種成本，加快選育進(jìn)程，而且可以實(shí)現(xiàn)多基因的聚合育種，提高育種效率。傳統(tǒng)的PCR分子標(biāo)記，如SSR(microsatellites/simplesequence?repeat)、CAPS(cleaved?amplifiedpolymorphic?sequence)，檢測技術(shù)均依賴凝膠電泳，CAPS標(biāo)記還需要酶切等繁瑣程序，標(biāo)記存在小麥品種特異性，擴(kuò)增重復(fù)性差，檢測效率低下。

單核苷酸的多態(tài)性(single?nucleotide?polymorphisms，SNP)是指基因組內(nèi)單個(gè)核苷酸改變而引起的DNA序列多態(tài)性。競爭性等位基因特異性PCR(kompetitive?allelespecific?PCR，KASP)是一種以SNP為基礎(chǔ)的第三代新型基因分型技術(shù)。該技術(shù)基于PCR過程中引物末端堿基的特異性匹配，實(shí)現(xiàn)對(duì)SNP/InDel(insertion-deletion)分型，能夠精確區(qū)分雙等位基因。KASP技術(shù)不依賴實(shí)驗(yàn)室凝膠電泳，具有高通量、遺傳穩(wěn)定性好、檢測成本低、準(zhǔn)確性高，適宜規(guī)模化自動(dòng)化篩查等特點(diǎn)。目前，KASP標(biāo)記在小麥基因定位、圖位克隆以及分子標(biāo)記輔助選擇育種中廣為應(yīng)用。

YrAS2388基因源自節(jié)節(jié)麥材料AS2388，是一個(gè)已克隆的小麥條銹病抗性基因，編碼典型的抗病基因蛋白，具有兩個(gè)重復(fù)的3'非編碼區(qū)3'UTR1和3'UTR2，賦予小麥、大麥對(duì)條銹菌的抗性。在節(jié)節(jié)麥群體中存在功能型YrAS2388R和非功能型YrAS2388S位點(diǎn)。功能型YrAS2388R表現(xiàn)對(duì)小麥條銹菌的廣譜抗性且未被廣泛應(yīng)用于小麥抗病育種，對(duì)培育抗條銹病小麥品種具有重要的利用價(jià)值(Zhang?et?al.An?ancestral?NB-LRR?with?duplicated3’UTRs?confers?stripe?rust?resistance?in?wheat?and?barley,NatureCommunications,2019,10:4023)。