[發(fā)明專利]抗條銹病基因YrAS2388R的KASP分子標記及引物、試劑盒和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110932690.4
• 申請日: 2021-08-13
• 公開（公告）號: CN113637790B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發(fā)明（設計）人: 黃林;胡燕靈;王芳;劉登才;伍碧華;張連全;袁中偉;甯順腙;郝明;姜博
• 申請（專利權）人: 四川農業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

1.一種抗條銹病基因YrAS2388R的KASP分子標記，其特征在于，該KASP分子標記的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.用于擴增如權利要求1所述的KASP分子標記的引物組，其特征在于，該引物組的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的YrAS2388-KASP-E5A、核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示的YrAS2388-KASP-E5B和核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示的YrAS2388-KASP-E5C。

3.根據權利要求2所述的引物組，其特征在于，所述YrAS2388-KASP-E5A和YrAS2388-KASP-E5B的5’端添加不同的熒光標簽序列，所述熒光標簽序列為：核苷酸序列如SEQ?IDNO.7所示的HEX熒光標簽序列，或核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8所示的FAM熒光標簽序列。

4.一種檢測YrAS2388基因的KASP分子標記方法，其特征在于，該方法包含：

以提取的待檢測小麥基因組DNA為模板，采用如權利要求2或3所述的引物組進行熒光定量PCR擴增，對PCR擴增產物進行熒光掃描，分析PCR擴增產物的基因型：

若只檢測到YrAS2388-KASP-E5A-HEX對應的堿基A，則待檢測小麥含有純合的YrAS2388R基因；

若只檢測到YrAS2388-KASP-E5B-FAM對應的堿基G或既未檢測到YrAS2388-KASP-E5A-HEX對應的堿基A也未檢測到YrAS2388-KASP-E5B-FAM對應的堿基G，則待檢測小麥不含YrAS2388R基因；

若同時檢測到YrAS2388-KASP-E5A-HEX對應的堿基A和YrAS2388-KASP-E5B-FAM對應的堿基G，則待檢測小麥含有雜合YrAS2388R基因。

5.根據權利要求4所述的KASP分子標記方法，其特征在于，所述PCR擴增的體系包含：KASP?Mastermix、模板DNA、如權利要求2或3所述的引物組、ddH₂O。

6.根據權利要求4所述的KASP分子標記方法，其特征在于，所述PCR擴增的程序為：95℃預變性10min；95℃變性20s；61～55℃退火延伸40s，10個循環(huán)，每個循環(huán)降低0.6℃；95℃變性20s，55℃退火延伸40s，32個循環(huán)。

7.YrAS2388基因的KASP分型檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒中的引物為如權利要求2或3所述的引物組。

8.如權利要求1所述的KASP分子標記或如權利要求2或3所述的引物組的應用，其特征在于，KASP分子標記或引物組在如下任一項中的應用：

(1)對小麥抗條銹病基因YrAS2388R的檢測或鑒定；

(2)對小麥條銹菌的防治；

(3)對小麥抗條銹病品種的選育。