[發明專利]一種HPLC-MS-MS法測定SD大鼠血漿中咪喹莫特成分含量的方法

有效

• 申請號: 202110910998.9
• 申請日: 2021-08-10
• 公開（公告）號: CN113567590B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 李明;盤建紅
• 申請（專利權）人: 安領生物醫藥（蘇州）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 蘇州隆恒知識產權代理事務所(普通合伙) 32366
• 代理人: 周子軼

本發明提供一種HPLC?MS?MS法測定SD大鼠血漿中咪喹莫特成分含量的方法，包括以下步驟：分別向校正標示樣品、質控樣品、內標樣品以及待測SD大鼠樣品中加入10.0ng/mL咪喹莫特?D9內標工作液稀釋20倍，分別離心取上清液，然后再分別將上清液用超純水溶液稀釋2倍即可進樣分析。分別向空白基質和溶劑樣中加入空白基質和超純水，再分別用乙腈稀釋20倍，分別離心取上清液，然后再分別將上清液用超純水溶液稀釋2倍即可進樣分析。將上述處理后的各個樣品分別注入液相色譜質譜聯用儀中，對咪喹莫特以及咪喹莫特?D9成分進行定量檢測。本發明對樣品分析簡單便捷，檢出限低、靈敏度高、重復性和回收率好。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種HPLC-MS-MS法測定SD大鼠血漿中咪喹莫特成分含量的方法。

背景技術

生物樣品分析隨著質譜技術的發展，其應用日益廣泛。但由于生物樣品中的基質復雜，且藥物濃度低。因此，需要獲得更準確且穩定的測定方法。HPLC-MS-MS技術中，高效液相色譜是溶質在固定相和流動相之間進行的一種連續多次的交換過程，它借助溶質在兩相間的分配系數、親和力、吸附能力、離子交換或分子大小不同引起的排阻作用差別使不同溶質進行分離。因此，亟待開發出一種采用HPLC-MS-MS技術，建立并驗證SD大鼠血漿中咪喹莫特濃度測定的液質聯用方法，旨在獲得更加準確且穩定性高的含量測定方法，從而便于科研以及工業化應用。

發明內容

為了克服現有技術中的缺陷，本發明的目的在于提供一種HPLC-MS-MS法測定SD大鼠血漿中咪喹莫特成分含量的方法，其對樣品分析簡單便捷，檢出限低、靈敏度高、重復性和回收率好。

本發明的目的通過以下技術方案得以實現：

本發明提供一種HPLC-MS-MS法測定SD大鼠血漿中咪喹莫特成分含量的方法，包括以下步驟：

步驟一、樣品制備：

制備校正標示樣品：以咪喹莫特為溶質，以乙腈水溶液為溶劑，配制咪喹莫特不同梯度濃度的校正標示工作液；分別取各濃度校正標示工作液，用空白基質稀釋，得到校正標示樣品；

制備質控樣品：以咪喹莫特為溶質，以乙腈水溶液為溶劑，配制咪喹莫特不同梯度濃度的質控工作液；分別取各濃度質控工作液，用空白基質稀釋，得到質控樣品；

步驟二、樣品處理：

分別向校正標示樣品、質控樣品、內標樣品以及待測SD大鼠血漿中加入咪喹莫特-D9內標工作液稀釋，分別離心取上清液，然后再分別將上清液用超純水溶液稀釋；

分別向空白基質和溶劑樣中加入乙腈稀釋，分別離心取上清液，然后再分別將上清液用超純水溶液稀釋；

步驟三、樣品檢測：

將上述步驟二中處理后的校正標示樣品、質控樣品、內標樣品、待測SD大鼠血漿、空白基質和水樣分別注入液相色譜質譜聯用儀中，對咪喹莫特以及咪喹莫特-D9成分進行定量檢測，通過回歸和數據處理獲得SD大鼠血漿中咪喹莫特成分含量。

作為優選，所述步驟一中，制備校正標示樣品和質控樣品所采用的乙腈水溶液的體積濃度均為50％；采用空白基質稀釋的倍數均為20倍。

作為優選，所述步驟一中，校正標示工作液中的咪喹莫特的梯度濃度為20.0～10000ng/mL；質控工作液中的咪喹莫特的梯度濃度為20.0～8000ng/mL。

作為優選，所述步驟二中，采用的咪喹莫特-D9內標工作液的濃度為10.0ng/mL；利用其對校正標示樣品、質控樣品、內標樣品以及待測SD大鼠血漿進行稀釋的倍數為20倍；采用超純水溶液稀釋的倍數為2倍。

作為優選，向空白基質和溶劑樣中加入乙腈稀釋的倍數為20倍；采用超純水溶液稀釋的倍數為2倍。