[發明專利]一種HPLC-MS-MS法測定SD大鼠血漿中咪喹莫特成分含量的方法

有效

• 申請號: 202110910998.9
• 申請日: 2021-08-10
• 公開（公告）號: CN113567590B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 李明;盤建紅
• 申請（專利權）人: 安領生物醫藥（蘇州）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 蘇州隆恒知識產權代理事務所(普通合伙) 32366
• 代理人: 周子軼

1.一種HPLC-MS-MS法測定SD大鼠血漿中咪喹莫特成分含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、樣品制備：

制備校正標示樣品：稱量一定量的咪喹莫特，溶解于甲酸、乙腈、水的體積比為0.1:50:50的溶液中，得到1.00?mg/mL咪喹莫特儲備液；取1.00?mg/mL咪喹莫特儲備液，以50%乙腈水溶液為溶劑，配制咪喹莫特20.0~10000?ng/mL梯度濃度的校正標示工作液；分別取各濃度校正標示工作液，用空白基質稀釋，得到校正標示樣品；

制備質控樣品：稱量一定量的咪喹莫特，溶解于甲酸、乙腈、水的體積比為0.1:50:50的溶液中，得到1.00?mg/mL咪喹莫特儲備液；取1.00?mg/mL咪喹莫特儲備液，以50%乙腈水溶液為溶劑，配制咪喹莫特20.0~8000?ng/mL梯度濃度的質控工作液；分別取各濃度質控工作液，用空白基質稀釋，得到質控樣品；

步驟二、樣品處理：

分別向校正標示樣品、質控樣品、內標樣品以及待測SD大鼠血漿中加入咪喹莫特-D9內標工作液稀釋，所述內標工作液以乙腈為溶劑，分別離心取上清液，然后再分別將上清液用超純水溶液稀釋；

分別向空白基質和溶劑樣中加入乙腈稀釋，分別離心取上清液，然后再分別將上清液用超純水溶液稀釋；

步驟三、樣品檢測：

將上述步驟二中處理后的校正標示樣品、質控樣品、內標樣品、待測SD大鼠血漿、空白基質和溶劑樣分別注入液相色譜質譜聯用儀中，對咪喹莫特以及咪喹莫特-D9成分進行定量檢測，通過回歸和數據處理獲得SD大鼠血漿中咪喹莫特成分含量；其中，按照下述液相色譜條件進行檢測：

固定相：填料粒徑為5μm，直徑2.1?mm，長度50?mm的ACE?5?C18-PFP色譜柱；

流動相：流動相為A和B的混合體系，A為甲酸水溶液，其中甲酸與水的體積比為0.02:100；B為甲酸乙腈溶液，其中甲酸與乙腈的體積比為0.02:100；

洗脫梯度為：

0.01min，A的體積百分比為90%，B的體積百分比為10%；

2.00min，A的體積百分比為0%，B的體積百分比為100%；

2.80min，A的體積百分比為0%，B的體積百分比為100%；

2.81min，A的體積百分比為90%，B的體積百分比為10%；

3.00min，A的體積百分比為90%，B的體積百分比為10%。

2.根據權利要求1所述的HPLC-MS-MS法測定SD大鼠血漿中咪喹莫特成分含量的方法，其特征在于，所述步驟一中，制備校正標示樣品和質控樣品所采用空白基質稀釋的倍數均為20倍。

3.根據權利要求1所述的HPLC-MS-MS法測定SD大鼠血漿中咪喹莫特成分含量的方法，其特征在于，所述步驟二中，采用的咪喹莫特-D9內標工作液的濃度為10.0?ng/mL；利用其對校正標示樣品、質控樣品、內標樣品以及待測SD大鼠血漿進行稀釋的倍數為20倍；采用超純水溶液稀釋的倍數為2倍；

向空白基質和溶劑樣中加入乙腈稀釋的倍數為20倍；采用超純水溶液稀釋的倍數為2倍。

4.根據權利要求1所述的HPLC-MS-MS法測定SD大鼠血漿中咪喹莫特成分含量的方法，其特征在于，所述步驟三中，所述液相色譜的進樣器清洗液為：弱洗采用30%甲醇水溶液，強洗采用甲醇、乙腈、異丙醇、水按照體積比1:1:1:1混合而成。

5.根據權利要求1所述的HPLC-MS-MS法測定SD大鼠血漿中咪喹莫特成分含量的方法，其特征在于，所述步驟三中，按照下述液相色譜條件進行檢測：

流速：0.40?mL/min；

柱溫：40℃；

自動進樣器溫度：4℃；

進樣量：10μL。