[發明專利]一種基于NtPIF1基因表達水平篩選硃砂煙植株的方法

有效

• 申請號: 202110908424.8
• 申請日: 2021-08-09
• 公開（公告）號: CN113584210B
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發明（設計）人: 宋中邦;隋學藝;張誼寒;王亞輝
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/29
• 代理公司: 成都市鼎宏恒業知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51248
• 代理人: 吳錦德

1.基于NtPIF1基因篩選硃砂煙植株的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步驟：單株掛牌編號、葉片取樣、RNA提取及cDNA合成、基因表達水平檢測、套袋自交收種;所述的步驟具體為：

步驟(1)單株掛牌編號：所有待篩煙草單株掛牌，并標記唯一編號；

步驟(2)葉片取樣：取煙株幼嫩葉片組織0.1g置于液氮保存；

步驟(3)RNA提取及cDNA合成：提取葉片組織總RNA，并反轉錄成cDNA；

步驟(4)基因表達水平檢測：根據NtPIF1基因序列設計特異qPCR引物，以葉片cDNA為模板進行qPCR分析，NtPIF1基因表達水平達到標準即為硃砂煙植株；

步驟(5)根據qPCR結果找到對應編號植株，套袋自交收種，獲得穩定的硃砂煙遺傳資源;所述的步驟(4)標準為：達到低于內參基因Actin的1/100，即Target/Reference＜1*10^-2;?NtPIF1基因序列為SEQ?ID?NO.1;?所述的步驟(5)獲得穩定的硃砂煙遺傳資源的標準為8個后代植株，葉片的NtPIF1基因表達水平低于內參基因Actin的1/100，即Target/Reference＜1*10^-2；所有單株的烤后葉片均呈現顯著的硃砂特征，表明篩選成功。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(4)特異qPCR引物為NtPIF1qF1：CGGAGGTGGCAGCGGTGATGC、NtPIF1qR1：ACGTTCGAAGGAGGAGGAGTC；

NtACTIN基因作為內參，為：

NtACTINq_F_1:CTGAGGTCCTTTTCCAACCA、

NtACTINq_R_1:TACCCGGGAACATGGTAGAG。