[發(fā)明專利]一種酶活提高及最適pH改變的NADH氧化酶突變體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110908307.1
• 申請(qǐng)日: 2021-08-09
• 公開（公告）號(hào): CN113667651B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊套偉;饒志明;武文慧;張顯;徐美娟;邵明龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/02
• 分類號(hào): C12N9/02;C12N15/53;C12P7/26
• 代理公司: 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 趙巧娜

1.一種NADH氧化酶突變體，其特征在于，所述突變體是將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的NADH氧化酶的第20位的天冬酰胺突變?yōu)樘於彼幔瑫r(shí)將第66位的酪氨酸突變?yōu)樘於彼岬玫降模?/p>

或?qū)被嵝蛄腥鏢EQ?ID?NO.1所示的NADH氧化酶的第20位的天冬酰胺突變?yōu)樘於彼幔瑫r(shí)將第116位的天冬酰胺突變?yōu)楣劝彼岬玫降摹?/p>

2.編碼權(quán)利要求1所述NADH氧化酶突變體的基因。

3.攜帶權(quán)利要求2所述基因的重組載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體以pETDust系列載體作為出發(fā)載體。

5.表達(dá)權(quán)利要求1所述突變體，或攜帶權(quán)利要求2所述基因，或攜帶權(quán)利要求3或4所述重組載體的重組細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組細(xì)胞，其特征在于，所述重組細(xì)胞以大腸桿菌作為宿主細(xì)胞。

7.一種降低NADH氧化酶的最適pH及提高酶活的方法，其特征在于，所述方法為，

將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的NADH氧化酶的第20位的天冬酰胺突變?yōu)樘於彼幔瑫r(shí)將第66位的酪氨酸突變?yōu)樘於彼岬玫降模?/p>

或?qū)被嵝蛄腥鏢EQ?ID?NO.1所示的NADH氧化酶的第20位的天冬酰胺突變?yōu)樘於彼幔瑫r(shí)將第116位的天冬酰胺突變?yōu)楣劝彼岬玫降摹?/p>

8.一種再生輔酶NAD+的方法，其特征在于，所述方法為，將權(quán)利要求1所述的突變體，或權(quán)利要求5或6所述的重組細(xì)胞添加至含有溶解氧和NADH的反應(yīng)體系中，反應(yīng)制備得到NAD+。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，反應(yīng)條件為：20～28℃，pH?7.0～7.5。

10.權(quán)利要求2所述的基因，或權(quán)利要求3或4所述的重組載體在增加微生物胞內(nèi)NAD+含量，或在制備可增加微生物胞內(nèi)NAD+含量的產(chǎn)品中的應(yīng)用。