[發(fā)明專利]一種使用Excel精確檢測(cè)SOD酶活的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110902914.7
• 申請(qǐng)日: 2021-08-06
• 公開（公告）號(hào): CN113624753A
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于曉軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京百賽生物色譜技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/78
• 分類號(hào): G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 南京源古知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32300
• 代理人: 鄭宜梅

本發(fā)明公開一種使用Excel精確檢測(cè)SOD酶活的方法，將加入SOD酶液之后每間隔1min的數(shù)據(jù)記錄入Excel，分別為5組數(shù)據(jù)，5點(diǎn)的數(shù)值在Excel上模擬出對(duì)應(yīng)曲線并計(jì)算偏差，當(dāng)曲線線性擬合度在99%以上時(shí)，判斷此時(shí)的鄰苯三酚自氧化速率擬制曲線為直線，計(jì)算直線的斜率K'，當(dāng)K'/K=50%時(shí)，將△'A325的吸光值代入公式1，得出SOD酶活，本發(fā)明在傳統(tǒng)化學(xué)法的基礎(chǔ)上，對(duì)測(cè)量數(shù)據(jù)用Excel進(jìn)行精準(zhǔn)分析，判斷檢測(cè)點(diǎn)，從而得出精確酶活，精確檢測(cè)SOD酶活。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于SOD酶活的檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種使用Excel精確檢測(cè)SOD酶活的方法。

背景技術(shù)

SOD是生物體系中抗氧化酶系的重要組成成員，廣泛分布在微生物、植物和動(dòng)物體內(nèi)，傳統(tǒng)SOD酶活的測(cè)定方法很多，常見的有化學(xué)法、免疫法和等電點(diǎn)聚焦法。其中化學(xué)法應(yīng)用最普遍，化學(xué)法的原理主要是利用有些化合物在自氧化過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生有色中間物和O₂-，利用SOD分解而間接推算SOD酶活。在化學(xué)方法中，最常用的有黃嘌呤氧化酶法，鄰苯三酚法，化學(xué)發(fā)光法，腎上腺素法，NBT-還原法，光化學(xué)擴(kuò)增法，Cyte還原法等。但在化學(xué)法測(cè)量SOD酶活時(shí)存在無(wú)法對(duì)測(cè)量數(shù)據(jù)進(jìn)行精準(zhǔn)計(jì)算的問(wèn)題，為滿足SOD酶活的檢測(cè)需求，本發(fā)明提供一種使用Excel精確檢測(cè)SOD酶活的方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明的主要目的在于設(shè)計(jì)一種使用Excel精確檢測(cè)SOD酶活的方法,在傳統(tǒng)化學(xué)法的基礎(chǔ)上，對(duì)測(cè)量數(shù)據(jù)用Excel進(jìn)行精準(zhǔn)分析，判斷檢測(cè)點(diǎn)，從而得出精確酶活，解決在生物發(fā)酵中如何精確檢測(cè)SOD酶活。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種使用Excel精確檢測(cè)SOD酶活的方法，包括如下步驟：

步驟一：配制A液：pH值8.2；

0.1mL三羥甲基氨基甲烷(Tris)-鹽酸緩沖溶液（內(nèi)含1mmol/L EDTA·2Na）；

稱取1.2114 g Tris和37.2mgEDTA·2Na溶于62.4mL0.1moL鹽酸溶液中,用蒸餾水定容至100mL；

步驟二：配制B液：4.5mmoL鄰苯三酚鹽酸溶液；

稱取鄰苯三酚(A.R)56.7mg溶于少量10mmol/L鹽酸溶液,并定容至100mL；

步驟三：鄰苯三酚自氧化速率測(cè)定在25℃時(shí),于10mL比色管中依次加入A液2.35mL、蒸餾水2.00mL、B液0.15mL，加入B液立即混合并傾入比色皿中,分別測(cè)定在325nm波長(zhǎng)條件下初始時(shí)和1min后吸光值,二者之差即鄰苯三酚自氧化速率△A325(min-1)；

步驟四：SOD酶液抑制鄰苯三酚自氧化速率測(cè)定，按步驟三加入一定量酶液使抑制鄰苯三酚自氧化速率為△A325(min-1)的50%，此時(shí)的酶活定義為SOD酶活，計(jì)算公式為：

（公式1）

△A325-鄰苯三酚自氧化數(shù)率；

△’A325-SOD樣品抑制鄰苯三酚的自氧化速率；

V-所加SOD樣品的體積，單位mL；

D-SOD酶液的稀釋倍數(shù)；

4.5-反應(yīng)液總體積，單位mL；

步驟五：將加入SOD酶液之后每間隔1min的數(shù)據(jù)記錄入Excel，分別為5組數(shù)據(jù)，即△'1, △'2, △'3, △'4,△'5。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的描述，將步驟五中的5點(diǎn)的數(shù)值在Excel上作散點(diǎn)圖，然后用散點(diǎn)圖模擬出對(duì)應(yīng)趨勢(shì)線，在趨勢(shì)線圖中會(huì)顯示出曲線公式和偏差R²（即曲線擬合度），當(dāng)曲線線性擬合度在99%以上時(shí)，判斷此時(shí)的鄰苯三酚自氧化速率擬制曲線為直線。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的描述，計(jì)算直線的斜率K'，當(dāng)K'/K=50%時(shí)，將△'A325的吸光值代入公式1，得出SOD酶活。

相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的技術(shù)效果為：