[發明專利]一種具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法

在審

• 申請號: 202110901909.4
• 申請日: 2021-08-06
• 公開（公告）號: CN113502320A
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發明（設計）人: 鐘永捷;吳友菊;萬逸;左勇
• 申請（專利權）人: 海南微氪生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6816
• 分類號: C12Q1/6816;C12Q1/04
• 代理公司: 海口翔翔專利事務有限公司 46001
• 代理人: 劉清蓮

本發明提供一種具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法，包括下面的步驟：S1、取樣；S2、制備檢測液：將待檢測樣品稀釋，混勻并制成1:10檢測液；S3、檢測液的培養：將培養液加入步驟S2的檢測液中并放入37℃恒溫培養箱內培養；S4、制備智能生物探針的工作液：取智能生物探針以1:20000的比例加入到緩沖溶液中，混勻；S5、探針溶液的培養：將步驟S3中檢測液加入步驟S4中的工作液中，混勻形成探針溶液并培養；S6、目標細胞標記：智能生物探針對目標細胞進行熒光標記；S7、熒光檢測。本發明將具有穩定熒光特性的智能生物探針引入到微生物的檢測方法中，實現了微生物的快速檢測。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，尤其涉及一種具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法。

背景技術

傳統的微生物檢測方法是基于對細菌的標準生化分析以及選擇性培養的基礎上展開的，由于培養過程操作繁瑣、耗時長，使得微生物檢驗周期長，不具有實時性，不能及時反饋生產工藝和產品的現狀，因此需要引入微生物快速檢測方法。

隨著科技水平的不斷提高，一些快速微生物檢測方法已被開發，在基于微生物生長信息的快速檢測技術中，生物熒光技術得到了廣泛應用。熒光分析方法是一種先進的分析方法，具有靈敏度高、選擇性好、穩定性高且操作簡單等優點而被不斷的應用在各種分析檢驗過程中。基于熒光分析原理的熒光探針技術在檢測速度和易用性方面具有無可比擬的優點，作為一類重要的檢測手段已被廣泛應用于化學生物傳感和生物學等領域。

發明內容

針對上述問題，本發明的目的是提供一種具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法，能夠縮短檢測周期，簡化檢測步驟，實現微生物的快速檢測。

為達到上述目的，本發明所采取的技術手段為：

一種具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法，包括下面的步驟：

S1、取樣：獲取待檢測樣品；

S2、制備檢測液：將待檢測樣品稀釋，混合均勻并制成1:10檢測液；

S3、檢測液的培養：將培養液加入步驟S2的檢測液中，混勻并放入37℃恒溫培養箱內培養；

S4、制備智能生物探針的工作液：取具有穩定熒光特性的智能生物探針以1:20000的比例加入到緩沖溶液中，混勻；

S5、探針溶液的培養：將步驟S3中培養的檢測液加入步驟S4中制備的工作液中，混勻形成含有目標細胞的探針溶液并在室溫下進行進行培養；

S6、目標細胞標記：探針溶液中具有穩定熒光特性的智能生物探針對目標細胞進行熒光標記；

S7、熒光檢測：取步驟S6中的探針溶液移入流式細胞儀利用激光激發，進行熒光檢測。

進一步的，步驟S1～S7均在無菌環境下進行。

進一步的，步驟S2中使用PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液對待檢測樣品進行稀釋。

進一步的，步驟S3中的培養液配制方法為：RPMI1640培養液80％-90％、小牛血清10％-20％、谷氨酰氨1％及抗菌素(青霉素、鏈霉素)1萬單位1％。

進一步的，步驟S3檢測液的培養時間為10-60min。

進一步的，步驟S4中的緩沖溶液為HBSS溶液。

進一步的，步驟S5中的培養時間為15-60min。

進一步的，步驟S7中激光的激發波長為320-680nm，掃描范圍為350-800nm。

本發明的有益效果為：