[發明專利]一種具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法在審
| 申請號： | 202110901909.4 | 申請日： | 2021-08-06 |
| 公開（公告）號： | CN113502320A | 公開（公告）日： | 2021-10-15 |
| 發明（設計）人： | 鐘永捷;吳友菊;萬逸;左勇 | 申請（專利權）人： | 海南微氪生物科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6816 | 分類號： | C12Q1/6816;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 海口翔翔專利事務有限公司 46001 | 代理人： | 劉清蓮 |
| 地址： | 570000 海南省海口市南海大道266*** | 國省代碼： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 具有 穩定 熒光 特性 智能 生物 探針 微生物 檢測 方法 | ||
1.一種具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法，其特征在于，包括下面的步驟：
S1、取樣：獲取待檢測樣品；
S2、制備檢測液：將待檢測樣品稀釋，混合均勻并制成1:10檢測液；
S3、檢測液的培養：將培養液加入步驟S2的檢測液中，混勻并放入37℃恒溫培養箱內培養；
S4、制備智能生物探針的工作液：取具有穩定熒光特性的智能生物探針以1:20000的比例加入到緩沖溶液中，混勻；
S5、探針溶液的培養：將步驟S3中培養的檢測液加入步驟S4中制備的工作液中，混勻形成含有目標細胞的探針溶液并在室溫下進行培養；
S6、目標細胞標記：探針溶液中具有穩定熒光特性的智能生物探針對目標細胞進行熒光標記；
S7、熒光檢測：取步驟S6中的探針溶液移入流式細胞儀中利用激光激發，進行熒光檢測。
2.根據權利要求1所述的具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法，其特征在于,步驟S1～S7均在無菌環境下進行。
3.根據權利要求1所述的具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法，其特征在于，步驟S2中使用PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液對待檢測樣品進行稀釋。
4.根據權利要求1所述的具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法，其特征在于，步驟S3中的培養液配制方法為：RPMI1640培養液80％-90％、小牛血清10％-20％、谷氨酰氨1％及抗菌素(青霉素、鏈霉素)1萬單位1％。
5.根據權利要求1所述的具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法，其特征在于，步驟S3中檢測液的培養時間為10-60min。
6.根據權利要求1所述的具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法，其特征在于，步驟S4中的緩沖溶液為HBSS溶液。
7.根據權利要求1所述的具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法，其特征在于，步驟S5中的培養時間為15-60min。
8.根據權利要求1所述的具有穩定熒光特性的智能生物探針微生物檢測方法，其特征在于，步驟S7中激光共聚焦熒光顯微鏡的激發波長為320-680nm，掃描范圍為350-800nm。
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