[發明專利]一種心葉椴的組培工廠化育苗方法

在審

• 申請號: 202110900948.2
• 申請日: 2021-08-06
• 公開（公告）號: CN113615573A
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 張文杰;尹翠翠;冷江明;郭俊清
• 申請（專利權）人: 蘇州回文生物種業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 李嘉寧

1.一種心葉椴的組培工廠化育苗方法，包括如下步驟：

外植體的選擇:選擇健壯的椴樹，用芽體飽滿的新生枝條作為外植體；

外植體的消毒:將外植體清洗消毒后，晾干接種于啟動培養基上；啟動培養：消毒后的外植體接種于啟動培養基上，培養35天后，即可得無菌苗；

增殖培養/繼代培養：無菌苗的頂芽，以及莖段都可以用于增殖培養基上進行增殖培養/繼代增殖，可得用于繼代的組培苗或用于生根的生根苗；

生根培養：切取≥2cm的用于生根的生根苗的植株，基部小葉切去，基部到第一個腋芽處留0.5cm的莖段，接種于生根培養基上培養，培養28天即可得組培生根苗；

煉苗移栽：從培養基中取出植株，清洗干凈根部培養基，即可煉苗移栽，成活率98％。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述外植體的消毒的具體步驟為：

先用自來水沖洗外植體把表面沖洗干凈；將枝條切成小段，用容器盛放再沖洗一遍；用酒精水溶液浸泡，轉移到超凈工作臺內，然后用氯化汞水溶液浸泡，最后用無菌檸檬酸水溶液浸洗3遍，晾干后接種于啟動培養基上。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述消毒的具體步驟為：先用自來水沖洗外植體30min，把表面沖洗干凈；將枝條切成2-3cm的小段，用容器盛放再沖洗一遍；用70V％的酒精浸泡1min，轉移到超凈工作臺內，然后用0.1wt％的氯化汞溶液浸泡8min，最后用0.15wt％的無菌檸檬酸水浸洗3遍，晾干后接種于啟動培養基上。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述啟動培養基成分包含：基礎成分MS；0.3mg/L鹽酸硫胺素；30g/L蔗糖；4.5g/L植物瓊脂；3mg/L6-BA；0.1mg/L NAA；

所述基礎成分包含：六水合氯化鈷0.025mg/L；五水硫酸銅0.025mg/L；EDTA鈉鐵鹽36.7mg/L；硼酸6.3mg/L；碘化鉀0.83mg/L；一水合硫酸錳16.9mg/L；二水合鉬酸鈉0.25mg/L；七水合硫酸鋅8.6mg/L；二水合氯化鈣440mg/L；磷酸二氫鉀170mg/L；硝酸鉀1900mg/L；七水合硫酸鎂370mg/L；硝酸銨1650mg/L；鹽酸硫胺素0.1mg/L；肌醇100mg/L；煙酸0.5mg/L；鹽酸吡多辛0.5mg/L；甘氨酸2mg/L；

所述啟動培養的培養條件為：在溫度為25±3℃，光照強度1500-2100lux下，光照培養13h之后暗培養11h，連續培養35天得到無菌苗。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述增殖培養基成分包含：基礎成分MS；0.3mg/L鹽酸硫胺素；1.0mg/LL-抗壞血酸；30g/L蔗糖；4.5g/L植物瓊脂；0.3mg/L6-BA；0.03mg/LIBA；

所述增殖培養的具體步驟為：無菌苗的頂芽取1.0-1.5cm，無菌苗的莖段0.8-1.2cm至少帶2個芽點，接種于增殖培養基上；所述增殖培養/繼代培養的培養條件為：在溫度為25±3℃，光照強度1500-2100lux下，光照培養14h之后暗培養10h，連續培養40天后，即可得用于繼代的組培苗或用于生根的生根苗；增殖系數可達1：4-4.5，株高3.5cm；成活率合格率98％。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述生根培養基的成分包括：基礎成分MS；0.5mg/L葉酸；0.05mg/L生物素；30g/L蔗糖；4.5g/L植物瓊脂；0.5mg/LIBA；2.5mg/LIAA；0.25mg/LNAA；1.0g/L活性炭粉；

所述生根培養的培養條件為：在溫度為25±3℃，光照強度1500-2100lux下，光照培養14h之后暗培養10h，連續培養28天成活率99％，生根率100％。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：

所述啟動培養基成分包含：基礎成分MS；0.3mg/L鹽酸硫胺素；30g/L蔗糖；4.5g/L植物瓊脂；3mg/L6-BA；0.1mg/L NAA；

所述基礎成分包含：六水合氯化鈷0.025mg/L；五水硫酸銅0.025mg/L；EDTA鈉鐵鹽36.7mg/L；硼酸6.3mg/L；碘化鉀0.83mg/L；一水合硫酸錳16.9mg/L；二水合鉬酸鈉0.25mg/L；七水合硫酸鋅8.6mg/L；二水合氯化鈣440mg/L；磷酸二氫鉀170mg/L；硝酸鉀1900mg/L；七水合硫酸鎂370mg/L；硝酸銨1650mg/L；鹽酸硫胺素0.1mg/L；肌醇100mg/L；煙酸0.5mg/L；鹽酸吡多辛0.5mg/L；甘氨酸2mg/L；

所述啟動培養的培養條件為：在溫度為25±3℃，光照強度1500-2100lux下，光照培養13h之后暗培養11h，連續培養35天得到無菌苗；

所述增殖培養基成分包含：基礎成分MS；0.3mg/L鹽酸硫胺素；1.0mg/LL-抗壞血酸；30g/L蔗糖；4.5g/L植物瓊脂；0.3mg/L6-BA；0.03mg/LIBA；

所述生根培養基的成分包括：基礎成分MS；0.5mg/L葉酸；0.05mg/L生物素；30g/L蔗糖；4.5g/L植物瓊脂；0.5mg/LIBA；2.5mg/LIAA；0.25mg/LNAA；1.0g/L活性炭粉。