[發(fā)明專利]一種制備用于棉花胚珠空間轉(zhuǎn)錄組分析的切片的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110900264.2 | 申請(qǐng)日： | 2021-08-06 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN113640080B | 公開（公告）日： | 2023-05-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 馬雄風(fēng);孫旭武;劉祉辛;張先亮;代帥;梅崢;任翔;藏新山;劉浩 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所;河南大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | G01N1/28 | 分類號(hào)： | G01N1/28;G01N1/36;G01N1/34;G01N1/42;G01N1/30 |
| 代理公司： | 北京象合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11893 | 代理人： | 封明艷 |
| 地址： | 455000 河*** | 國(guó)省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 制備 用于 棉花 胚珠 空間 轉(zhuǎn)錄 組分 切片 方法 | ||
1.一種制備用于棉花胚珠空間轉(zhuǎn)錄組分析的切片的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
1)取新鮮棉花胚組織，修剪成合適大小的組織塊，清洗干凈并吸干水分，置于培養(yǎng)皿中；
2)將在冰上預(yù)冷后的OCT注入包埋盒，加入量不超包埋盒1/3，確認(rèn)組織切片方向，使用鑷子將新鮮組織放入裝有OCT的包埋盒中，再用OCT覆蓋暴露的組織表面，確認(rèn)在組織附近沒有氣泡，立即將含有組織和OCT的包埋盒放在干冰上或-80℃冰箱中冷凍30min，直至OCT完全凍結(jié)，
3)切片：OCT完全凍結(jié)后進(jìn)行切片，將樣品托固定到冰凍切片機(jī)的預(yù)冷樣品托持承器上，進(jìn)行切片，切片厚度為8-10μm；冰凍切片機(jī)預(yù)冷至-20℃，樣品托持承器溫度預(yù)冷至-20℃,
4)制片：將切片平展于速凍臺(tái)上，調(diào)整切片的角度，將切片貼在空間轉(zhuǎn)錄組專用的玻片上，得到用于棉花胚珠空間轉(zhuǎn)錄組分析的切片。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備用于棉花胚珠空間轉(zhuǎn)錄組分析的切片的方法，其特征在于，在步驟1)中，修剪棉花胚組織的大小為6.5mm×6.5mm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備用于棉花胚珠空間轉(zhuǎn)錄組分析的切片的方法，其特征在于，還包括步驟：通過HE染色確定目標(biāo)區(qū)域，然后進(jìn)行RNA質(zhì)檢。
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