[發明專利]一種N-甲基化多肽的固相合成方法

在審

• 申請號: 202110894992.7
• 申請日: 2021-08-04
• 公開（公告）號: CN114057829A
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 陳志立;譚保鋒;丁俊;張鑫
• 申請（專利權）人: 江蘇金斯瑞生物科技有限公司
• 主分類號: C07K1/34
• 分類號: C07K1/34;C07K1/30;C07K1/16;C07K1/10;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京華睿卓成知識產權代理事務所(普通合伙) 11436
• 代理人: 程淼

1.一種N-甲基化多肽的固相合成方法，其特征在于，在固相合成偶聯上N-甲基氨基酸后，在包含碳二亞胺型偶聯劑的催化下偶聯N-甲基氨基酸的下一位氨基酸。

2.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述碳二亞胺型偶聯試劑選自DIC/HOAT、DCC/HOAT或EDC/HOAT，優選DIC/HOAT。

3.根據權利要求1或2所述的合成方法，其特征在于，在偶聯N-甲基氨基酸的下一位氨基酸時，氨基酸原料的投入量為1eq～10eq，優選5eq；濃度為0.1M～1.5M，優選0.5M。

4.根據權利要求1～3中任一項所述的合成方法，其特征在于，在偶聯N-甲基氨基酸的下一位氨基酸時，偶聯反應溫度為20℃～100℃，優選30℃。

5.根據權利要求1～4中任一項所述的合成方法，其特征在于，在偶聯N-甲基氨基酸的下一位氨基酸時，偶聯反應時間為1h～48h，優選18h。

6.根據權利要求1～5中任一項所述的合成方法，其特征在于，除偶聯N-甲基氨基酸的下一位氨基酸以外，其他偶聯步驟的偶聯劑選自DIC/HOBT、DIC/HOAT、PyBOP/HOBT/DIEA、PyBOP/HOAT/DIEA、HATU/HOBT/DIEA、HATU/HOAT/DIEA、HBTU/HOBT/DIEA或TBTU/HOBT/DIEA，優選DIC/HOBT。

7.根據權利要求1～6中任一項所述的合成方法，其中所述固相合成包括在樹脂上按照N-甲基化多肽的序列從N端到C端的順序依次偶聯得到N-甲基化多肽-樹脂。

8.根據權利要求1～7中任一項所述的合成方法，其特征在于，在得到N-甲基化多肽-樹脂后，還進一步包括用切割試劑裂解的步驟，所述切割試劑為EDT、苯酚、茴香硫醚和H₂O中的至少一種溶劑與TFA的混合液。

9.根據權利要求8中所述的合成方法，其特征在于，所述切割試劑為TFA、EDT、苯酚、茴香硫醚和H₂O的混合液，體積比為87.5∶5∶2.5∶2.5∶2.5。

10.根據權利要求8或9中任一項所述的合成方法，其特征在于，切割試劑裂解時間為1h～4h，優選2.5h。

11.一種N-甲基化多肽的固相合成方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)樹脂脫除N端保護基后，按照N-甲基化多肽的序列從N端到C端的順序依次偶聯相應氨基酸，直至連接上N-甲基氨基酸；

(2)向步驟(1)得到的樹脂肽中加入N-甲基氨基酸的下一位氨基酸原料和包含碳二亞胺型偶聯劑，在合適條件下反應偶聯；

(3)步驟(2)得到的樹脂肽繼續順序偶聯剩余的氨基酸，獲得目標樹脂肽；

(4)加入切割試劑裂解樹脂肽，過濾沉析，獲得N-甲基化多肽粗品。

12.根據權利要求11所述的合成方法，其特征在于，所述步驟(2)中的碳二亞胺型偶聯劑選自DIC/HOAT、DCC/HOAT或EDC/HOAT，優選DIC/HOAT。

13.根據權利要求11或12所述的合成方法，其特征在于，所述步驟(2)中N-甲基氨基酸的下一位氨基酸原料投入量為1eq～10eq，優選為5eq；濃度為0.1M～1.5M，優選0.5M。

14.根據權利要求11～13中任一項所述的合成方法，所述步驟(2)的合適反應條件包括溫度為20℃～100℃反應1h～48h，優選溫度為30℃反應18h。