[發(fā)明專利]一種人白三烯受體CysLTR2 mRNA RT-PCR檢測(cè)用引物探針組和試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110891433.0
• 申請(qǐng)日: 2021-08-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113388679A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳周杰;吳善東;劉奕;蔣學(xué)翰;楊旭凱;李世旦;錢磊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 劉奇

本發(fā)明涉及一種人白三烯受體CysLTR2 mRNA RT?PCR檢測(cè)用引物探針組和試劑盒，屬于生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述引物探針組包括引物CysLTR2?F、引物CysLTR2?R和探針C2?Probe，所述引物CysLTR2?F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物CysLTR2?R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探針C2?Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本發(fā)明針對(duì)人CysLTR2建立的TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量一步法RT?PCR檢測(cè)引物探針組，為該蛋白的檢出提供準(zhǔn)確度高、檢測(cè)范圍廣及靈敏度高的檢測(cè)手段。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種人白三烯受體CysLTR2 mRNA RT-PCR檢測(cè)用引物探針組和試劑盒。

背景技術(shù)

白三烯是從花生四烯酸在白細(xì)胞中代謝產(chǎn)物分離得到的具有共軛三烯結(jié)構(gòu)的二十碳不飽和酸。可由花生四烯酸經(jīng)脂(肪)氧合酶(lipoxygenase)催化而制得。在體內(nèi)含量雖然很低，但卻具有很高的生理活性，是引發(fā)某些過(guò)敏反應(yīng)、炎癥以及心血管等疾病的化學(xué)介質(zhì)。白三烯在上下呼吸道的炎癥中起重要作用。在誘導(dǎo)鼻過(guò)敏反應(yīng)方面，白三烯的作用比組織胺強(qiáng)1000多倍。在變應(yīng)原誘導(dǎo)的鼻過(guò)敏反應(yīng)中，無(wú)論是在速發(fā)反應(yīng)還是遲發(fā)反應(yīng)階段，白三烯的數(shù)量都顯著增加。半胱氨酰白三烯(Cysteonyl leukotrienes，CysLTs)是哮喘和過(guò)敏性鼻炎(AR)的病理生理中的炎癥介質(zhì)和調(diào)節(jié)因子，是關(guān)鍵的治療靶點(diǎn)，CysLTs可以調(diào)節(jié)造血祖細(xì)胞生成、嗜酸性粒細(xì)胞在炎癥組織募集和存活、細(xì)胞因子和趨化因子的活性、呼出氣NO的數(shù)量、平滑肌的收縮和成纖維細(xì)胞的增殖。

CysLTs的生物學(xué)作用取決于細(xì)胞表面白三烯受體的表達(dá)。CysLTs受體有CysLTR1和CysLTR2兩種，其中CysLTR2為G蛋白偶聯(lián)受體，主要表達(dá)于心臟、肺靜脈、腎上腺髓質(zhì)、腸肌層神經(jīng)元等外周組織細(xì)胞中，在人腦中，CysLTR2表達(dá)在血管平滑肌細(xì)胞及浸潤(rùn)的粒細(xì)胞上。CysLTR2被白三烯激活后，將導(dǎo)致炎癥、血管通透性增加和組織的纖維化，會(huì)增加過(guò)敏性哮喘的風(fēng)險(xiǎn)；與腦缺血損傷也密切相關(guān)。

在治療的過(guò)程中，白三烯受體拮抗劑(LTRA)可以在體內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)性抑制白三烯與其受體的結(jié)合，阻斷CysLTs的活性，從而抑制炎性、過(guò)敏性反應(yīng)，但其療效具有明顯的個(gè)體差異，并且其療效與白三烯受體基因mRNA表達(dá)水平有明確的正相關(guān)?，F(xiàn)在已有報(bào)道的CysLT2受體拮抗劑包含HAMI 3379和Bay U9773。HAMI 3379對(duì)急性和亞急性缺血性腦損傷具有保護(hù)作用，并減輕小膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)的炎癥。Bay U9773對(duì)CysLT1和CysLT2有同等的親和力，可與這兩種受體結(jié)合，抑制支氣管和靜脈肌肉收縮。通過(guò)對(duì)CysLTR2mRNA表達(dá)水平的檢測(cè)，可判斷出患者是否因CysLTR2途徑導(dǎo)致的病癥，采用CysLT2受體拮抗劑是否有效果及實(shí)現(xiàn)治療效果的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。

現(xiàn)在市場(chǎng)上對(duì)于CysLTR2的檢測(cè)仍使用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA)試劑盒檢測(cè)其在體液中的含量，尚未見(jiàn)檢測(cè)CysLTR2 mRNA的商業(yè)化試劑盒。ELISA方法在檢測(cè)過(guò)程中存在著檢測(cè)范圍小和靈敏度低的問(wèn)題，且其準(zhǔn)確性也存在問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種人白三烯受體CysLTR2 mRNA RT-PCR檢測(cè)用引物探針組和試劑盒。本發(fā)明針對(duì)人CysLTR2建立的TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量一步法RT-PCR檢測(cè)引物探針組，為該蛋白的檢出提供準(zhǔn)確度高、檢測(cè)范圍廣及靈敏度高的檢測(cè)手段。

本發(fā)明提供了一種人白三烯受體CysLTR2 mRNA RT-PCR檢測(cè)用引物探針組，所述引物探針組包括引物CysLTR2-F、引物CysLTR2-R和探針C2-Probe，所述引物CysLTR2-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物CysLTR2-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探針C2-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。