[發明專利]一種人白三烯受體CysLTR2 mRNA RT-PCR檢測用引物探針組和試劑盒

在審

• 申請號: 202110891433.0
• 申請日: 2021-08-04
• 公開（公告）號: CN113388679A
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 吳周杰;吳善東;劉奕;蔣學翰;楊旭凱;李世旦;錢磊
• 申請（專利權）人: 杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種人白三烯受體CysLTR2 mRNA RT-PCR檢測用引物探針組，其特征在于，所述引物探針組包括引物CysLTR2-F、引物CysLTR2-R和探針C2-Probe，所述引物CysLTR2-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物CysLTR2-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探針C2-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根據權利要求1所述的引物探針組，其特征在于，所述探針C2-Probe的5'端標記熒光報告基團，3'端標記淬滅基團。

3.根據權利要求1所述的引物探針組，其特征在于，還包括內參基因的引物GAPDH-F、引物GAPDH-R和探針G-Probe，所述引物GAPDH-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述引物GAPDH-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述探針G-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

4.根據權利要求3所述的引物探針組，其特征在于，所述探針G-Probe的5'端標記熒光報告基團，3'端標記淬滅基團；探針G-Probe標記的熒光報告基團與探針C2-Probe標記的熒光報告基團不同。

5.根據權利要求2或4所述的引物探針組，其特征在于，所述熒光報告基團包括FAM或JOE，所述淬滅基團包括BHQ1。

6.一種人白三烯受體CysLTR2 mRNA RT-PCR檢測用試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1～5任一項所述引物探針組、PCR反應液、酶混合液、CysLTR2標準品、ROX參比染料和無核酶水。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應液包括dNTP mix、MgCl₂和緩沖液。

8.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述酶混合液包括Taq酶、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑和Taq酶抗體。

9.權利要求6、7或8所述試劑盒的使用方法，包括以下步驟：將引物探針組、PCR反應液、酶混合液、標準品或待測樣品、ROX參比染料和無核酶水混合后，進行熒光定量擴增。

10.根據權利要求9所述的使用方法，其特征在于，以20μL計，所述試劑盒的反應體系包括：引物探針組2μL、PCR反應液10μL、酶混合液0.5μL、ROX參比染料0.1μL、標準品或待測樣品5μL和無核酶水2.4μL；

所述熒光定量擴增的條件為：42℃30min；95℃1min；95℃5s，60℃31s，擴增40個循環。