[發明專利]一種人β-類胰蛋白酶mRNA RT-PCR檢測用引物探針組和試劑盒

在審

• 申請號: 202110890718.2
• 申請日: 2021-08-04
• 公開（公告）號: CN113564233A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 吳善東;程雷;劉奕;吳周杰;蔣學翰;雷薇;王吉萍
• 申請（專利權）人: 杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明涉及一種人β?類胰蛋白酶mRNART?PCR檢測用引物探針組和試劑盒，屬于生物檢測技術領域。本發明所述引物探針組包括引物TPSB?F、引物TPSB?R和探針T?Probe，所述引物TPSB?F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物TPSB?R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探針T?Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本發明針對人TPSB建立的TaqMan實時熒光定量一步法RT?PCR檢測引物探針組，為該蛋白的檢出提供準確度高、檢測范圍廣及靈敏度高的檢測手段。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體涉及一種人β-類胰蛋白酶mRNA RT-PCR檢測用引物探針組和試劑盒。

背景技術

肥大細胞在過敏反應中被激活，釋放包括類胰蛋白酶在內的炎癥介質，這一過程導致過敏反應的癥狀和體征。類胰蛋白酶具有促進氣道的修復、調節氣道平滑肌細胞的張力和反應性、刺激肥大細胞的活化等作用。目前，類胰蛋白酶在cDNA和蛋白水平被分為三類：α、β、γ，其中β含量最高。發生過敏反應后，血液循環中β-類胰蛋白酶(TPSB)水平的短暫升高有助于識別和評估過敏反應的程度，測定β-類胰蛋白酶水平短暫升高的樣品應在發生過敏反應后15分鐘至3小時采集。血液中短暫的β-類胰蛋白酶水平升高提示藥物、昆蟲毒液或食物引起過敏反應，長期持續的β-類胰蛋白酶水平升高則提示肥大細胞增生癥或血液腫瘤。鼻腔分泌物中β-類胰蛋白酶水平(或濃度)升高提示活動性過敏性鼻炎或是過敏性鼻炎患者正在變應原激發試驗。

現在市場上對于TPSB的檢測仍使用酶聯免疫吸附法(enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA)試劑盒檢測其在體液中的含量，尚未見檢測TPSB mRNA的商業化試劑盒。ELISA方法在檢測過程中存在著檢測范圍小和靈敏度低的問題，且其準確性也存在問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種人β-類胰蛋白酶mRNART-PCR檢測用引物探針組和試劑盒。本發明針對人TPSB建立的TaqMan實時熒光定量一步法RT-PCR檢測引物探針組，為該蛋白的檢出提供準確度高、檢測范圍廣及靈敏度高的檢測手段。

本發明提供了一種人β-類胰蛋白酶mRNART-PCR檢測用引物探針組，所述引物探針組包括引物TPSB-F、引物TPSB-R和探針T-Probe，所述引物TPSB-F的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述引物TPSB-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探針T-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

優選的是，所述探針T-Probe的5'端標記熒光報告基團，3'端標記淬滅基團。

優選的是，還包括內參基因的引物GAPDH-F、引物GAPDH-R和探針G-Probe，所述引物GAPDH-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述引物GAPDH-R的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示，所述探針G-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

優選的是，所述探針G-Probe的5'端標記熒光報告基團，3'端標記淬滅基團；探針G-Probe標記的熒光報告基團與探針T-Probe標記的熒光報告基團不同。

優選的是，所述熒光報告基團包括FAM或JOE，所述淬滅基團包括BHQ1。

本發明還提供了一種人β-類胰蛋白酶mRNART-PCR檢測用試劑盒，所述試劑盒包括上述技術方案所述引物探針組、PCR反應液、酶混合液、β-類胰蛋白酶標準品、ROX參比染料和無核酶水。

優選的是，所述PCR反應液包括dNTPmix、MgCl₂和緩沖液。

優選的是，所述酶混合液包括Taq酶、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑和Taq酶抗體。