[發(fā)明專利]一種人β-類胰蛋白酶mRNA RT-PCR檢測用引物探針組和試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110890718.2 | 申請日： | 2021-08-04 |
| 公開（公告）號： | CN113564233A | 公開（公告）日： | 2021-10-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 吳善東;程雷;劉奕;吳周杰;蔣學翰;雷薇;王吉萍 | 申請（專利權(quán)）人： | 杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務(wù)所 11569 | 代理人： | 劉奇 |
| 地址： | 310052 浙江省杭*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 胰蛋白酶 mrna rt pcr 檢測 引物 探針 試劑盒 | ||
1.一種人β-類胰蛋白酶mRNART-PCR檢測用引物探針組，其特征在于，所述引物探針組包括引物TPSB-F、引物TPSB-R和探針T-Probe，所述引物TPSB-F的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述引物TPSB-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探針T-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物探針組，其特征在于，所述探針T-Probe的5'端標記熒光報告基團，3'端標記淬滅基團。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物探針組，其特征在于，還包括內(nèi)參基因的引物GAPDH-F、引物GAPDH-R和探針G-Probe，所述引物GAPDH-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述引物GAPDH-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述探針G-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的引物探針組，其特征在于，所述探針G-Probe的5'端標記熒光報告基團，3'端標記淬滅基團；探針G-Probe標記的熒光報告基團與探針T-Probe標記的熒光報告基團不同。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或4所述的引物探針組，其特征在于，所述熒光報告基團包括FAM或JOE，所述淬滅基團包括BHQ1。
6.一種人β-類胰蛋白酶mRNART-PCR檢測用試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求1～5任一項所述引物探針組、PCR反應(yīng)液、酶混合液、β-類胰蛋白酶標準品、ROX參比染料和無核酶水。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應(yīng)液包括dNTPmix、MgCl2和緩沖液。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述酶混合液包括Taq酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑和Taq酶抗體。
9.權(quán)利要求6、7或8所述試劑盒的使用方法，包括以下步驟：將引物探針組、PCR反應(yīng)液、酶混合液、標準品或待測樣品、ROX參比染料和無核酶水混合后，進行熒光定量擴增。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的使用方法，其特征在于，以20μL計，所述試劑盒的反應(yīng)體系包括：引物探針組2μL、PCR反應(yīng)液10μL、酶混合液0.5μL、ROX參比染料0.1μL、標準品或待測樣品5μL和無核酶水2.4μL；
所述熒光定量擴增的條件為：42℃30min；95℃1min；95℃5s，60℃31s，擴增40個循環(huán)。
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