[發明專利]一種檢測非洲豬瘟病毒的CDA引物組、試劑盒及其應用有效
| 申請號： | 202110888873.0 | 申請日： | 2021-08-04 |
| 公開（公告）號： | CN113416799B | 公開（公告）日： | 2022-04-26 |
| 發明（設計）人： | 毛瑞;趙月;蔡挺 | 申請（專利權）人： | 國科寧波生命與健康產業研究院;中國科學院大學寧波華美醫院 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海碩力知識產權代理事務所(普通合伙) 31251 | 代理人： | 郭桂峰 |
| 地址： | 315016 *** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 非洲 豬瘟 病毒 cda 引物 試劑盒 及其 應用 | ||
1.一種非疾病診斷目的的檢測非洲豬瘟病毒的CDA引物組，其特征在于：所述引物組為ASFV-MF-3和ASFV-MR-3，其中ASFV-MF-3的核苷酸序列如SEQ ID NO. 5所示，ASFV-MR-3的核苷酸序列如SEQ ID NO. 6所示。
2.一種檢測非洲豬瘟病毒的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括權利要求1所述的CDA引物組。
3.根據權利要求2所述的一種檢測非洲豬瘟病毒的試劑盒，其特征在于：所述CDA引物組中的引物ASFV-MF-3和ASFV-MR-3在反應體系中的濃度均為1～2 μM。
4.根據權利要求2所述的一種檢測非洲豬瘟病毒的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括Bst聚合酶、CDA反應緩沖液、超純水和顯色劑；所述CDA反應緩沖液包括Tris-HCl、KCl、(NH4)2SO4、MgSO4和Triton X-100。
5.根據權利要求4所述的一種檢測非洲豬瘟病毒的試劑盒，其特征在于：所述顯色劑選自Sybr green I、Eva green、羥基萘酚藍、鉻黑T中的一種。
6.根據權利要求2所述的一種檢測非洲豬瘟病毒的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒的反應體系的組成為：
2-50 mM Tris-HCl pH8.8；
2-20 mM KCl；
2-20 mM (NH4)2SO4；
2～20 mM MgSO4；
0.1～0.5 % Triton X-100；
0.2～1 M 甜菜堿；
1～1.6 mM dNTP；
5～10 U Bst DNA 聚合酶；
100～150μmol/ L 顯色劑；
1～2 μM 引物ASFV-MF-3；
1～2 μM 引物ASFV-MR-3；
反應溶劑為超純水。
7.權利要求6所述的試劑盒用于非疾病診斷目的的檢測非洲豬瘟病毒的方法，包括以下步驟：
步驟1，將待檢測核酸樣本和試劑盒的反應體系混合，制得擴增反應液；
步驟2，由步驟1制得的擴增反應液，于60～65℃反應20～80 min，根據顯色結果判斷樣品是否含有非洲豬瘟病毒。
8.權利要求1所述的CDA引物組在以非疾病診斷為目的的非洲豬瘟病毒檢測中的應用。
9.權利要求2-6任一項所述的試劑盒在以非疾病診斷為目的的非洲豬瘟病毒檢測中的應用。
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