[發(fā)明專利]一種含外泌體滴眼液及其制備方法和應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110886978.2
• 申請日: 2021-08-03
• 公開（公告）號: CN113559122A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發(fā)明（設計）人: 李阿峰;明磊國;王清霞
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西科美致尚生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K31/716;A61K9/08;A61K47/36;A61P27/02;A61P37/06;C12N5/0775
• 代理公司: 西安銘澤知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

本發(fā)明涉及滴眼液制備方法領域，具體公開了一種含外泌體滴眼液及其制備方法和應用，所述滴眼液由間充質(zhì)干細胞外泌體，β?葡聚糖，滲透壓調(diào)節(jié)劑，pH調(diào)節(jié)劑和營養(yǎng)補充劑組成。本發(fā)明制備的滴眼液對眼部刺激小，穩(wěn)定性高，對外泌體活性具有保護作用。

技術領域

本發(fā)明涉及滴眼液制備方法領域，具體涉及一種含外泌體滴眼液及其制備方法和應用。

背景技術

眼睛由于存在血眼屏障、缺乏淋巴引流系統(tǒng)等原因，常常被認為是免疫赦免器官。盡管如此，眼部仍可發(fā)生嚴重的免疫介導性眼病，如甲狀腺相關眼病、自身免疫性葡萄膜炎及Sjogren綜合征等，輕則影響患者的日常生活，重則引起嚴重的視力損害，甚至失明。現(xiàn)階段，臨床上以糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑為主的治療方法療效欠佳、且易復發(fā)，因而亟需開拓該類疾病的診治思路與策略。外泌體是一種由細胞分泌的脂質(zhì)雙分子層囊泡，其中包含蛋白質(zhì)、脂質(zhì)及核酸等生物活性分子，在細胞間通訊起著重要的媒介作用。既往研究發(fā)現(xiàn)，外泌體具有重要的炎癥及免疫調(diào)節(jié)作用。

角膜緣干細胞是一群位于角膜緣基底部Vogt柵欄處的干細胞，維持角膜上皮的穩(wěn)定與更新，角膜緣干細胞條件培養(yǎng)液中含有大量角膜緣干細胞分泌的細胞因子、生長因子以及外泌體。利用角膜緣干細胞條件培養(yǎng)液培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞，可以促進間充質(zhì)干細胞的活性，并且可以誘導間充質(zhì)干細胞獲得角膜緣干細胞的特征，分泌出的外泌體，具有角膜緣干細胞外泌體的特性，促進角膜上皮的穩(wěn)定與更新，同時可以調(diào)節(jié)重要的炎癥及免疫調(diào)節(jié)作用。β-葡聚糖能夠活化巨噬細胞與嗜中性白血球等，因此能提高白細胞素、細胞分裂素和特殊抗體含量，全面刺激機體免疫系統(tǒng)，使受傷機體淋巴細胞產(chǎn)生細胞因子(IL-1)的能力迅速恢復正常，有效調(diào)節(jié)機體免疫機能。β-葡聚糖能夠幫助改善炎癥和炎癥疾病患者的免疫反應潛力。

目前外泌體只能在2-8℃穩(wěn)定保存3天，－20℃穩(wěn)定保存1個月。長期保存需要－80℃低溫，并且不能凍融，存儲條件要求高，這些缺點影響了外泌體的深入研究。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術問題，本發(fā)明提供了一種含外泌體滴眼液及其制備方法和應用，通過將外泌體與β-葡聚糖結(jié)合，利用葡聚糖的活性及特性，保護外泌體的穩(wěn)定性同時，協(xié)同提升外泌體的功效，對眼部疾病具有很好的預防作用。

本發(fā)明的第一個目的是提供了一種含外泌體滴眼液，由以下質(zhì)量分數(shù)的組分制成：

β-葡聚糖0.1-3％，滲透壓調(diào)節(jié)劑0.19-0.21％，ph調(diào)節(jié)劑0.019-0.021％和營養(yǎng)補充劑0.01-5％，余量為間充質(zhì)干細胞外泌體/β-葡聚糖水溶液；

所述β-葡聚糖水溶液質(zhì)量分數(shù)為0.1-3％。

進一步地，所述的間充質(zhì)干細胞外泌體為臍帶間充質(zhì)干細胞或脂肪間充質(zhì)干細胞。

進一步地，所述的間充質(zhì)干細胞外泌體是在人角膜緣基質(zhì)細胞條件培養(yǎng)液中誘導培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞分泌的外泌體。

進一步地，所述的β-葡聚糖為β-1，3葡聚糖。

進一步地，所述的β-1，3葡聚糖的分子量為1-2600kDa。

進一步地，所述滲透壓調(diào)節(jié)劑為葡聚糖、甘露糖醇、甘油和生理鹽水中的任意一種或幾種的混合。

本發(fā)明還提供了上述含外泌體滴眼液的制備方法，包括如下步驟：

S1，間充質(zhì)干細胞外泌體的制備：

首先，收集人角膜緣基質(zhì)細胞按照0.2-1ⅹ10⁵/cm²的密度接種于完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待細胞生長至細胞密度為80-85％時，收集上清，即得到人角膜緣基質(zhì)細胞條件培養(yǎng)液，將其加入到間充質(zhì)干細胞中誘導培養(yǎng)，待細胞培養(yǎng)至細胞密度為85％-90％時，棄掉上清，清洗細胞，繼續(xù)培養(yǎng)24-48h，收集上清液，離心后獲得間充質(zhì)干細胞外泌體，備用；