[發明專利]一種含外泌體滴眼液及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110886978.2
• 申請日: 2021-08-03
• 公開（公告）號: CN113559122A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 李阿峰;明磊國;王清霞
• 申請（專利權）人: 陜西科美致尚生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K31/716;A61K9/08;A61K47/36;A61P27/02;A61P37/06;C12N5/0775
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

1.一種含外泌體滴眼液，其特征在于，由以下質量分數的組分制成：

滲透壓調節劑0.19-0.21％，ph調節劑0.019-0.021％和營養補充劑0.01-5％，余量為間充質干細胞外泌體/β-葡聚糖水溶液；

所述β-葡聚糖水溶液質量分數為0.1-3％。

2.如權利要求1所述的含外泌體滴眼液，其特征在于，所述的間充質干細胞外泌體為臍帶間充質干細胞或脂肪間充質干細胞。

3.如權利要求2所述的含外泌體滴眼液，其特征在于，所述的間充質干細胞外泌體是在人角膜緣基質細胞條件培養液中誘導培養間充質干細胞分泌的外泌體。

4.如權利要求3所述的含外泌體滴眼液，其特征在于，所述的β-葡聚糖為β-1，3葡聚糖。

5.如權利要求4所述的含外泌體滴眼液，其特征在于，所述的β-1，3葡聚糖的分子量為1-2600kDa。

6.如權利要求5所述的含外泌體滴眼液，其特征在于，所述滲透壓調節劑為葡聚糖、甘露糖醇、甘油和生理鹽水中的任意一種或幾種的混合。

7.一種權利要求1-6任一項所述的含外泌體滴眼液的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1，間充質干細胞外泌體的制備：

首先，收集人角膜緣基質細胞按照0.2-1ⅹ10⁵/cm²的密度接種于完全培養基中培養，待細胞生長至細胞密度為80-85％時，收集上清，即得到人角膜緣基質細胞條件培養液，將其加入到間充質干細胞中誘導培養，待細胞培養至細胞密度為85％-90％時，棄掉上清，清洗細胞，繼續培養24-48h，收集上清液，離心后獲得間充質干細胞外泌體，備用；

S2，將β-葡聚糖加入注射用水中，加熱至80℃左右，攪拌溶解后，降溫至室溫，獲得β-葡聚糖水溶液，備用；

S3，將S1制得的間充質干細胞外泌體與S2中制得的β-葡聚糖水溶液混合均勻，加入滲透壓調節劑、ph調節劑和營養補充劑，攪拌溶解完全，過濾除菌，獲得含外泌體滴眼液。

8.如權利要求7所述的含外泌體滴眼液的制備方法，其特征在于，S1中，所述人角膜緣基質細胞的培養條件為37℃、5％CO₂。

9.如權利要求7所述的含外泌體滴眼液的制備方法，其特征在于，S1中，離心的具體過程為：1000rpm離心10分鐘，去除死細胞和細胞碎片，取上清，獲得的上清10，000×g離心30分鐘，取上清，100，000×g，在4℃下持續離心60-120分鐘，去掉上清，留下的沉淀PBS重懸，獲得間充質干細胞外泌體。

10.一種權利要求1-6任一項所述的β-葡聚糖在含外泌體滴眼液制備中的用途，其特征在于，β-葡聚糖用于保護外泌體的穩定性，提升外泌體的功效。