[發明專利]評估USH2A外顯子13剔除效率的MINI-REP基因及其表達載體和應用

在審

• 申請號: 202110884031.8
• 申請日: 2021-08-03
• 公開（公告）號: CN115704031A
• 公開（公告）日: 2023-02-17
• 發明（設計）人: 梁峻彬;歐家裕;徐輝
• 申請（專利權）人: 廣州瑞風生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/85;C12N15/65;C12N5/10;G01N21/64
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 李海恬

本發明涉及評估USH2A外顯子13剔除效率的MINI?REP基因及其表達載體和應用，涉及基因工程技術領域。該MINI?REP基因包括報告基因和小基因，所述報告基因為行使報告功能的基因，所述小基因包括依次連接的USH2A內含子12、外顯子13和內含子13的基因；所述小基因插入所述報告基因，將所述報告基因分割成斷裂報告基因，所述斷裂報告基因單獨表達均不發揮報告功能，串聯完整表達則發揮報告功能。所述MINI?REP基因可應用于現有技術中所有用于誘導USH2A外顯子13剔除的相關技術的效率評估，可用于新型技術的研發、效果檢測盒高效篩選，可用于USH2A外顯子13剔除效率的快速、直觀、高效、高靈敏度的定性和定量分析。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，具體涉及評估USH2A外顯子13剔除效率的MINI-REP基因及其表達載體和應用。

背景技術

Usher綜合征(Usher Syndrome)是一類遺傳性疾病，又稱耳聾-色素性視網膜炎綜合征，其特征是不同程度的先天性感音神經性耳聾，以及色素性視網膜炎(RP)引起的進行性視力喪失。在臨床上Usher綜合征可分為3種類型：1、Ⅰ型Usher綜合征，患者表現出先天性重深度感音神經性耳聾，前庭反應消失，青春期前出現色素性視網膜炎，逐漸致盲，其關聯基因為MYO7A、CDH23、USH1C、PCHD15等；2、Ⅱ型Usher綜合征，患者表現出先天性中重度感音神經性耳聾，前庭反應正常，青春期出現色素性視網膜炎，逐漸致盲，其關聯基因為USH2A、GPR98、WHRN等；3、Ⅲ型Usher綜合征，患者表現出進行性感音神經性耳聾，前庭反應正常，青春期末出現色素性視網膜炎，逐漸致盲，其關聯基因為CLRN1等。

其中，II型占Usher綜合癥的比例超過50％。而USH2A基因突變是Usher綜合征II型的最常見原因，涵蓋超過50％的Usher綜合征患者。同時，USH2A基因的突變也是導致非綜合征性視網膜色素變性(NSRP)的重要原因之一。

USH2A定位于1q41，其在基因組中的跨度超過800kb，編碼一個大型跨膜蛋白Usherin，其錨定在視網膜感光細胞和內耳毛細胞的質膜上，是纖毛發育和維持必不可少的組分。在視網膜中，Usherin是USH2復合物的重要部分，被認為在穩定光感受器的外節段發揮作用。USH2A具有2個亞型，在視網膜細胞中主要的亞型含有72個Exon，編碼區長度約為15.6kb。Usherin蛋白的胞外部分包含許多重復的結構域，包括10個Laminin EGF-like(LE)結構域和35個Fibronectin type 3(FN3)結構域。人USH2A外顯子13長度為642bp，編碼著第723～936位氨基酸，為Usherin蛋白中10個LE結構域中的4個。

USH2A基因的第13號外顯子13、第50號外顯子和第40號內含子的突變會引發Usher綜合征。迄今為止已經鑒定出超過1000個分布在整個USH2A基因中的致病性突變，其中的外顯子13是USH2A基因中突變最頻繁的外顯子，約占35％。USH2A基因第13號外顯子的突變，包括c.2802TG(p.Cys934Trp，中國患者頻率最高突變)、c.2299delG(p.E767SfsX21，歐美患者頻率最高突變)、c.2276GT(氨基酸變化:p.C759F)、c.2522CA(p.S841Y)、c.2242CT(p.Gln748X)、c.2541CA(C847X)、c.2761delC(Leu921fs)和c.2776CT(p.R926C)、c.2209CT、c.2310delA、c.2391_2392deITG、c.2431AT、c.2431_2432delAA、c.2440CT、c.2525dup、c.2610CA、c.2755CT、c.2176TC、c.2236CG、c.2296TC、c.2332GT。