[發明專利]一種鑒定性連鎖矮小基因的引物組及其應用在審
| 申請號： | 202110870820.6 | 申請日： | 2021-07-30 |
| 公開（公告）號： | CN113430277A | 公開（公告）日： | 2021-09-24 |
| 發明（設計）人： | 孫從佼;徐桂云;王喜瓊;莊景杰 | 申請（專利權）人： | 中國農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385 | 代理人： | 戴嵩瑋 |
| 地址： | 100193 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 鑒定 連鎖 矮小 基因 引物 及其 應用 | ||
本發明涉及動物育種領域，特別是涉及一種鑒定性連鎖矮小基因的引物組及其應用。本發明在GHR基因缺失段內部設計檢測dw基因的上游引物，在GHR缺失段的上游設計檢測DW基因的上游引物，并統一將下游引物設計在GHR缺失段的下游，通過多重PCR反應，利用缺失段內部和缺失區段兩端同時進行擴增，這樣ZDWZDW和ZDWW個體只能檢測到未缺失區段的擴增產物，ZdwW和ZdwZdw個體只能檢測到缺失后的片段，而雜合子ZDWZdw個體則能同時檢測到兩種片段，通過本引物組能夠快速、準確地鑒定雞只個體在性連鎖矮小基因座位的基因型。
技術領域
本發明涉及動物育種領域，特別是涉及一種鑒定性連鎖矮小基因的引物組及其應用。
背景技術
雞性連鎖矮小基因(dw基因)是雞性染色體上的生長激素受體(GHR)基因3’-非翻譯區(3’-UTR)存在近1.7kb的缺失突變形成的等位基因。1935年蘇聯學者Behtank就發現了dw基因。dw基因位于雞Z染色體上肝臟壞死基因in位點與無翼基因we位點之間，靠近銀色(S)及金色(s)羽基因和慢羽(K)、快羽(k)基因，dw基因與銀色基因和慢羽基因的交換值分別為7％和6.6％。
dw基因是已知的8種矮小基因中的一種，有別于其他具有明顯致病或致死效應的大多數矮小基因。諸多研究都表明，此基因是唯一對雞本身健康無害，而對人類有利的隱形伴性突變基因。相比于正常體型雞，由其培育而成的基因隱性純合的矮小雞僅有正常體型雞體重的2/3，具有基礎代謝率低、耗料量少、飼養密度大、適應性和抗應激強等諸多優勢。
而dw基因屬于伴性遺傳，正常基因DW對dw顯性，因此只有矮小型純合子的公雞和攜帶矮小型基因的母雞才表現矮小性狀。明顯的外部特征為脛骨縮短20％左右，而ZDWZdw的雜合子公雞表型正常，不能與ZDWZDW的純合非矮小公雞區分。所以能從分子水平上準確鑒定性連鎖矮小基因攜帶雞的基因型可以加快矮小雞育種效率。
發明內容
為了解決上述問題，本發明提供了一種鑒定性連鎖矮小基因的引物組及其應用。本發明提供的引物組能夠快速、準確地鑒定性連鎖矮小基因攜帶雞的基因型。
為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：
本發明提供了一種鑒定性連鎖矮小基因的引物組，包括引物對1和引物對2；
所述引物對1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述引物對1的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；
所述引物對2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述引物對2的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
本發明還提供了上述引物組在鑒定性連鎖矮小基因攜帶雞中的應用。
本發明還提供了一種鑒定性連鎖矮小基因攜帶雞的試劑或試劑盒，所述試劑或試劑盒包括上述的引物組。
本發明還提供了一種鑒定性連鎖矮小基因攜帶雞的方法，包括以下步驟：
以樣本雞的基因組DNA或總RNA反轉錄得到的cDNA為模板，利用上述引物組進行PCR擴增，得到擴增產物；
擴增產物的判斷包括：當含有600bp～700bp的擴增產物時，則樣本雞為性連鎖矮小基因攜帶雞。
優選的，所述PCR反應程序包括：94℃預變性5min；94℃變性30s，58℃復性30s，72℃延伸40s，循環35次；72℃延伸5min。
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