[發(fā)明專利]一種用于重組蛋白表達(dá)的啟動(dòng)子及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110864017.1
• 申請(qǐng)日: 2021-07-29
• 公開（公告）號(hào): CN113528527B
• 公開（公告）日: 2023-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周勉;歐陽(yáng)雅琦;許寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84
• 代理公司: 上海華工專利事務(wù)所(普通合伙) 31104
• 代理人: 繆利明;趙孟琴

1.一種用于重組蛋白表達(dá)的甲醇誘導(dǎo)型啟動(dòng)子P₀₅₄₇，其特征在于，所述甲醇誘導(dǎo)型啟動(dòng)子P₀₅₄₇的序列如NCBI登錄號(hào)為NC_012963.1的5’端起第2416633位至第2417632位所示。

2.一種用于重組蛋白表達(dá)的組成型啟動(dòng)子P₀₄₇₂，其特征在于，所述組成型啟動(dòng)子P₀₄₇₂的序列如NCBI登錄號(hào)為NC_012964.1的5’端起第874193位至第875192位所示。

3.一種甲醇誘導(dǎo)型啟動(dòng)子P₀₅₄₇或組成型啟動(dòng)子P₀₄₇₂在大規(guī)模生物反應(yīng)器和/或小規(guī)模生物反應(yīng)器的重組蛋白表達(dá)中的應(yīng)用，其特征在于，所述P₀₅₄₇啟動(dòng)子的序列如NCBI登錄號(hào)為NC_012963.1的5’端起第2416633位至第2417632位所示，所述P₀₄₇₂啟動(dòng)子的序列如NCBI登錄號(hào)為NC_012964.1的5’端起第874193位至第875192位所示。

4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述大規(guī)模生物反應(yīng)器為3-5L的生物反應(yīng)器；所述小規(guī)模生物反應(yīng)器為≥0.1L且小于3L的生物反應(yīng)器。

5.一種GS115-啟動(dòng)子-GFP表達(dá)菌株，其特征在于，其是以引物序列分別如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.6所示的PAGR1和PGFPF2為引物擴(kuò)增綠色熒光蛋白GFP表達(dá)框，通過(guò)一步克隆試劑盒將所述GFP表達(dá)框、P₀₅₄₇啟動(dòng)子連接至pPIC?9K載體中構(gòu)建后轉(zhuǎn)化GS115菌株獲得；或者，其是以引物序列分別如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.6所示的PAGR1和PGFPF2為引物擴(kuò)增綠色熒光蛋白GFP表達(dá)框，通過(guò)一步克隆試劑盒將所述GFP表達(dá)框、P₀₄₇₂啟動(dòng)子連接至pPIC9K載體中構(gòu)建后轉(zhuǎn)化GS115菌株獲得，所述P₀₅₄₇啟動(dòng)子的序列如NCBI登錄號(hào)為NC_012963.1的5’端起第2416633位至第2417632位所示，所述P₀₄₇₂啟動(dòng)子的序列如NCBI登錄號(hào)為NC_012964.1的5’端起第874193位至第875192位所示。

6.一種GS115-啟動(dòng)子-AMY表達(dá)菌株，其特征在于，其是通過(guò)PCR擴(kuò)增重組α-淀粉酶表達(dá)框，并與啟動(dòng)子P₀₄₇₂一起連接到pPIC?9K載體構(gòu)建后轉(zhuǎn)化GS115菌株獲得；或者，其是通過(guò)PCR擴(kuò)增重組α-淀粉酶表達(dá)框，并與啟動(dòng)子P₀₅₄₇一起連接到pPIC?9K載體構(gòu)建后轉(zhuǎn)化GS115菌株獲得，其中，所述P₀₅₄₇啟動(dòng)子的序列如NCBI登錄號(hào)為NC_012963.1的5’端起第2416633位至第2417632位所示，所述P₀₄₇₂啟動(dòng)子的序列如NCBI登錄號(hào)為NC_012964.1的5’端起第874193位至第875192位所示。

7.一種如權(quán)利要求5所述的GS115-啟動(dòng)子-GFP表達(dá)菌株在大規(guī)模生物反應(yīng)器和/或小規(guī)模生物反應(yīng)器的重組蛋白表達(dá)中的應(yīng)用。

8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述大規(guī)模生物反應(yīng)器為3-5L的生物反應(yīng)器；所述小規(guī)模生物反應(yīng)器為≥0.1L且小于3L的生物反應(yīng)器。

9.一種如權(quán)利要求6所述的GS115-啟動(dòng)子-AMY表達(dá)菌株在大規(guī)模生物反應(yīng)器和/或小規(guī)模生物反應(yīng)器的重組蛋白表達(dá)中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述大規(guī)模生物反應(yīng)器為3-5L的生物反應(yīng)器；所述小規(guī)模生物反應(yīng)器為≥0.1L且小于3L的生物反應(yīng)器。