[發明專利]一種串聯雙促溶標簽及其應用

在審

• 申請號: 202110851968.5
• 申請日: 2021-07-27
• 公開（公告）號: CN113637698A
• 公開（公告）日: 2021-11-12
• 發明（設計）人: 雷苗;孫秋菊
• 申請（專利權）人: 武漢菲恩生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/62;C12N15/66;C07K1/22
• 代理公司: 武漢紅觀專利代理事務所(普通合伙) 42247
• 代理人: 王昌亮

1.一種串聯雙促溶標簽，其特征在于：包括促溶標簽IF2DI和SUMO以及內含肽Mxe。

2.如權利要求1所述的一種串聯雙促溶標簽，其特征在于：所述促溶標簽IF2DI的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述促溶標簽SUMO的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述內含肽Mxe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.一種串聯雙促溶標簽在蛋白表達純化中的應用，其特征在于：包括如下步驟：

S1，構建表達載體pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe；

S2，將目的基因X插入表達載體pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe的HindIII和XhoI酶切位點之間；

S3，將插入目的基因的表達載體pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe-X轉入表達菌株中，誘導表達；

S4，誘導后破碎菌株細胞，進行可溶蛋白的鎳柱親和純化，得到純合的目的蛋白。

4.如權利要求3所述的一種串聯雙促溶標簽在蛋白表達純化中的應用，其特征在于，步驟S1的表達載體采用PCR及酶切連接方法，將IF2DI、SUMO和Mxe序列連接，并插入pET28a載體，獲得pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe載體。

5.如權利要求4所述的一種串聯雙促溶標簽在蛋白表達純化中的應用，其特征在于，所述IF2DI促溶標簽插入pET28a載體的方法為：人工合成IF2DI基因序列，并將該基因插入pET28a載體的NcoI和NdeI酶切位點之間，構建表達載體pET28a-IF2DI，并將載體轉化到大腸桿菌DH5a感受態細胞中。

6.如權利要求5所述的一種串聯雙促溶標簽在蛋白表達純化中的應用，其特征在于，所述SUMO促溶標簽插入pET28a載體的方法為：通過PCR技術擴增出SUMO的基因片段，并將其插入pET28a-IF2DI質粒的NdeI和BamHI酶切位點之間，位于IF2DI基因的下游，構建表達載體pET28a-IF2DI-SUMO，并將載體轉化到大腸桿菌DH5a感受態細胞中。

7.如權利要求6所述的一種串聯雙促溶標簽在蛋白表達純化中的應用，其特征在于，所述內含肽Mxe插入pET28a載體的方法為：通過PCR技術擴增出內含肽Mxe蛋白的基因片段，并將其插入pET28a-IF2DI-SUMO質粒的BamHI和HindIII酶切位點之間，位于SUMO基因的下游，構建表達載體pET28a-IF2DI-SUMO-Mxe，并將載體轉化到大腸桿菌DH5a感受態細胞中。