[發明專利]一種細胞分裂素氧化酶活性檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202110851578.8
• 申請日: 2021-07-27
• 公開（公告）號: CN113588850A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 王黔
• 申請（專利權）人: 蘇州夢犀生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 蘇州匯德卓越專利代理事務所(普通合伙) 32496
• 代理人: 郭海濤

本發明公開了一種細胞分裂素氧化酶活性檢測試劑盒及檢測方法，屬于試劑盒技術領域，試劑盒中包括試劑一：20mmol/LpH 6.0磷酸緩沖溶液；試劑二：1mmol/L氯化錳溶液；試劑三：1mmol/L反式玉米素(tZ)溶液；試劑四：乙酸；利用反式玉米素(tZ)在細胞分裂素氧化酶的作用下，降解為腺嘌呤的原理，可通過檢測tZ含量，利用反應前后tZ含量的變化量，計算得出細胞分裂素氧化酶的活性。該發明中可以檢測的tZ含量可達到ng/mL，檢測時間短，可對植物體各個部位的細胞分裂素氧化酶活性進行檢測，適用性廣。

技術領域

本發明屬于試劑盒技術領域，具體涉及一種細胞分裂素氧化酶活性檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

隨著農業的快速發展，對農業學科領域的研究也隨之快速發展。在植物學科領域內，植物激素一直都是研究的重點，細胞分裂素(cytokinin，CTK)是五大植物激素之一，是直接調控作物產量的一種植物激素，是植物自身合成的微量有機物質，在植物體內含量極微，但對植物生長發育具有顯著影響，參與植物的發育、形態建成、抗病、抗逆等生物學進程，其主要作用是促進細胞分裂和擴大，促進芽分化和側芽發育，延緩衰老和打破休眠等。

細胞分裂素氧化酶(cytokinin oxidase/dehydrogenase，CKX)是合成細胞分裂素的關鍵酶，細胞分裂素的含量在植物體內的動態平衡需要細胞分裂素氧化酶(cytokininoxidase/dehydrogenase，CKX)的維持，細胞分裂素氧化酶能斷裂細胞分裂素側鏈使其失活，可防止細胞分裂素積累過多而產生毒害。因此細胞分裂素氧化酶對于植物體自身合成細胞分裂素起著關鍵作用，間接控制著植物的生長發育。

而現有技術中還沒有合適的檢測方法能夠檢測細胞分裂素氧化酶的活性，因此植物農學領域的科研工作者不能更加深入地研究植物激素的生成過程，研究進展停滯不前。

發明內容

本發明的目的在于提供一種細胞分裂素氧化酶活性檢測試劑盒及檢測方法，以解決背景技術中提出的技術問題。

為了實現上述目的，本發明公開了一種細胞分裂素氧化酶活性檢測試劑盒，包括以下試劑：

試劑一：20mmol/L pH 6.0磷酸緩沖溶液，4℃保存；

試劑二：1mmol/L氯化錳溶液，4℃保存；

試劑三：1mmol/L反式玉米素溶液，4℃保存；

試劑四：乙酸，4℃保存。

本發明同時要求保護一種細胞分裂素氧化酶活性的檢測方法，使用上述的細胞分裂素氧化酶活性檢測試劑盒進行，包括如下步驟：(1)細胞分裂素氧化酶的提取和降解反應； (2)儀器檢測；(3)進行細胞分裂素氧化酶活性的計算。

進一步地，步驟(1)中，采用試劑一對植物樣本進行細胞分裂素氧化酶的提取。

進一步地，步驟(1)中，采用提取出的細胞分裂素氧化酶對反式玉米素進行降解反應，得到細胞分裂素氧化酶樣本溶液。

進一步地，步驟(2)中，準備已知濃度的反式玉米素標準品溶液，采用高效液相色譜儀分別對步驟(2)中得到的細胞分裂素氧化酶樣本溶液，以及反式玉米素標準品溶液進行測試。

進一步地，采用高效液相色譜儀檢測時，流動相為甲醇和水的混合液，并加入試劑四，混勻；其中甲醇和水的體積比為40:60。

進一步地，步驟(3)中，細胞分裂素氧化酶活性按樣本鮮重計算：

細胞分裂素氧化酶活性＝[(S對照+0.2924)/28.1091-(S測定+0.2924)/28.1091]·V提取/ (T·W·M)；

該公式中，細胞分裂素氧化酶活性代表每質量單位植物樣本組織每單位時間消耗每摩爾單位的反式玉米素，即為一個酶活力單位；