[發明專利]一種細胞分裂素氧化酶活性檢測試劑盒及檢測方法在審
| 申請號： | 202110851578.8 | 申請日： | 2021-07-27 |
| 公開（公告）號： | CN113588850A | 公開（公告）日： | 2021-11-02 |
| 發明（設計）人： | 王黔 | 申請（專利權）人： | 蘇州夢犀生物醫藥科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/06 | 分類號： | G01N30/06;G01N30/74 |
| 代理公司： | 蘇州匯德卓越專利代理事務所(普通合伙) 32496 | 代理人： | 郭海濤 |
| 地址： | 215124 江蘇省蘇州市工業園區*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 細胞分裂 氧化酶 活性 檢測 試劑盒 方法 | ||
1.一種細胞分裂素氧化酶活性檢測試劑盒，其特征在于：包括以下試劑：
試劑一：20mmol/LpH 6.0磷酸緩沖溶液，4℃保存；
試劑二：1mmol/L氯化錳溶液，4℃保存；
試劑三：1mmol/L反式玉米素溶液，4℃保存；
試劑四：乙酸，4℃保存。
2.一種細胞分裂素氧化酶活性的檢測方法，使用如權利要求1所述的細胞分裂素氧化酶活性檢測試劑盒進行，其特征在于：包括如下步驟：(1)細胞分裂素氧化酶的提取和降解反應；(2)儀器檢測；(3)進行細胞分裂素氧化酶活性的計算。
3.如權利要求2所述的檢測方法，其特征在于：步驟(1)中，采用試劑一對植物樣本進行細胞分裂素氧化酶的提取。
4.如權利要求3所述的檢測方法，其特征在于：步驟(1)中，采用提取出的細胞分裂素氧化酶對反式玉米素進行降解反應，得到細胞分裂素氧化酶樣本溶液。
5.如權利要求4所述的檢測方法，其特征在于：步驟(2)中，準備已知濃度的反式玉米素標準品溶液，采用高效液相色譜儀分別對步驟(2)中得到的細胞分裂素氧化酶樣本溶液，以及反式玉米素標準品溶液進行測試。
6.如權利要求5所述的檢測方法，其特征在于：采用高效液相色譜儀檢測時，流動相為甲醇和水的混合液，并加入試劑四，混勻；其中甲醇和水的體積比為40:60。
7.如權利要求6所述的檢測方法，其特征在于：步驟(3)中，細胞分裂素氧化酶活性按樣本鮮重計算：
細胞分裂素氧化酶活性＝[(S對照+0.2924)/28.1091-(S測定+0.2924)/28.1091]·V提取/(T·W·M)；
其中，細胞分裂素氧化酶活性代表每質量單位植物樣本組織每單位時間消耗每摩爾單位的反式玉米素，即為一個酶活力單位；
其中，S測定：細胞分裂素氧化酶樣本溶液中反式玉米素的峰面積，S對照：反式玉米素標準品溶液中反式玉米素的峰面積；V提取：提取的總體積；T：步驟(1)中降解反應的時間，W：步驟(1)中植物樣本的質量；M：反式玉米素的相對分子質量。
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