[發(fā)明專利]一種與油茶種子油脂中亞油酸含量相關(guān)的DNA片段及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110846310.5
• 申請日: 2021-07-26
• 公開（公告）號: CN113604593B
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 常君;林萍;姚小華;王開良
• 申請（專利權(quán)）人: 中國林業(yè)科學(xué)研究院亞熱帶林業(yè)研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;A01H1/04
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 張璐

本發(fā)明涉及分子標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種與油茶種子油脂中亞油酸含量相關(guān)的DNA片段及其應(yīng)用。本發(fā)明所提供的與油茶種子油脂中亞油酸含量相關(guān)的DNA片段，其為位于油茶連鎖圖譜11號連鎖群163.975cM處的yys.11?1。本發(fā)明還提供與油茶種子油脂中亞油酸含量位點緊密連鎖的SNP分子標(biāo)記Chr11?114235680，其為含有如SEQ?ID?NO.1所示序列第203位的多態(tài)性為C/T的核苷酸序列，可以解釋9.6％的油茶種子油脂中亞油酸含量的表型方差。本發(fā)明通過檢測所述的SNP分子標(biāo)記，在苗期對油茶種子油脂中亞油酸含量進行鑒定和輔助篩選，大大節(jié)約生產(chǎn)成本，提高油茶油脂性狀選擇育種的選擇效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于油茶分子標(biāo)記及遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種與油茶種子油脂中亞油酸含量相關(guān)的DNA片段、其緊密連鎖的SNP標(biāo)記及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

油茶(Camellia?oleifera)作為四大油料(油菜、花生、大豆和油茶)之一，在亞熱帶地區(qū)廣泛種植，種植面積達6500萬畝以上。油茶籽油不飽和脂肪酸含量達90％以上，且富含角鯊烯、維生素E等營養(yǎng)成分，是一種優(yōu)質(zhì)的食用油，被稱為“東方橄欖油”。選育高產(chǎn)(油)質(zhì)優(yōu)的油茶優(yōu)良品種一直是油茶產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的基礎(chǔ)和保障。一直以來，以選擇和雜交育種為主要手段的油茶育種工作取得了長足的進展，但油茶的常規(guī)育種周期長，新品種選育緩慢，良種選育速度還不能滿足產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求，這已成為限制油茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素之一。

油茶籽油中的油酸含量相對穩(wěn)定，但亞油酸含量變動范圍在2％-17％，且與品種(系)的遺傳特性有關(guān)。亞油酸(18∶2,n-6)是人體不能合成但又是必需的不飽和脂肪酸(EFA)，它是合成前列腺素的主要原料，并具有降低膽固醇和血脂，改善血液流變性及其預(yù)防冠心病等特殊功能。

相比于傳統(tǒng)育種技術(shù)，分子標(biāo)記輔助育種可從苗期開始選擇，大幅縮短育種的周期，對以果實為主要目的的經(jīng)濟林育種優(yōu)勢尤其明顯。分子標(biāo)記輔助育種離不開有效的分子標(biāo)記，因此，開發(fā)與油茶油脂中脂肪酸含量相關(guān)的分子標(biāo)記，對于油茶油脂品質(zhì)的分子標(biāo)記輔助育種及相關(guān)性狀的遺傳改良具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種與油茶種子油脂中亞油酸含量相關(guān)的DNA片段及與該基因位點緊密連鎖的分子標(biāo)記，本發(fā)明的另一目的是提供所述分子標(biāo)記在油茶高亞油酸含量表型鑒定和育種中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的油茶種子油脂中亞油酸含量基因位點及與所述基因位點緊密連鎖的分子標(biāo)記的開發(fā)是基于已建立的油茶F1代雜交群體，開展高密度遺傳連鎖圖構(gòu)建和亞油酸含量性狀的QTL定位實現(xiàn)的。油茶的簡化基因組序列為本發(fā)明標(biāo)記開發(fā)的區(qū)域。

本發(fā)明中油茶種子油脂中亞油酸含量基因位點及連鎖的SNP分子標(biāo)記的開發(fā)過程基本如下：

(1)亞油酸含量差異顯著的油茶無性系長林53號(11.23％)和長林81號(6.73％)控制授粉，創(chuàng)制亞油酸含量廣泛分離的油茶F1代雜交群體。

(2)采集雜交群體180個單株的完全成熟種子，測定油脂中亞油酸含量。其操作步驟如下：

1)適量油茶種子用烤箱80℃烘烤過夜至恒重，剝?nèi)ビ卜N皮。

2)種仁用粉碎機粉碎后，用中速濾紙包好，加入適量石油醚浸泡抽提過夜。

3)待石油醚完全揮發(fā)后，利用Agilent6890N氣相色譜儀按照GB/T17376-2008、GB/T17377-2008方法測定脂肪酸成分及含量。

脂肪酸成分含量測定結(jié)果表明：F1群體種子油中亞油酸含量呈正態(tài)分布，說明種子油中亞油酸含量性狀具有數(shù)量性狀特點。