[發明專利]氈毛青霉DZ-9-67及其在杜仲葉總黃酮提取中的應用

有效

• 申請號: 202110844947.0
• 申請日: 2021-07-26
• 公開（公告）號: CN113564055B
• 公開（公告）日: 2023-09-01
• 發明（設計）人: 陳虹;張建芬;柯薇;陸胤
• 申請（專利權）人: 浙江樹人學院（浙江樹人大學）
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N3/00;A61K36/46;C12R1/80
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

本發明公開了一種氈毛青霉DZ?9?67及其在杜仲葉總黃酮提取中的應用，杜仲葉粉中加入無菌蔗糖水溶液，接種氈毛青霉DZ?9?67孢子，于28–30℃發酵2–3d，發酵物加入50％–70％乙醇水溶液中浸提后，再進行超聲提取，抽濾，濾液濃縮后，獲得濃縮物，真空干燥，獲得杜仲葉總黃酮粗提物。本發明提供的杜仲葉總黃酮提取方法，較不采用發酵預處理的超聲乙醇提取法相比，杜仲葉總黃酮的提取得率可以提高34.2％。

(一)技術領域

本發明屬于生物化工技術領域，具體涉及一株氈毛青霉DZ-9-67及其在杜仲葉總黃酮提取中的應用。

(二)背景技術

杜仲(Eucommia?ulmoides?Oliv.)，又名膠木，為杜仲科杜仲屬植物。杜仲在我國栽培已有兩千多年的歷史。我國第一部藥書漢代的《神農本草經》就記載了杜仲樹皮的藥效，并將杜仲列為上品。明代李時珍著作《本草綱目》中更為詳細的記述了杜仲藥名的由來和藥效。2020年版中國藥典一部藥材和飲片中收錄了杜仲(Eucommiae?Cortex)和杜仲葉(Eucommiae?Folium)。藥典記載杜仲的功能與主治為：補肝腎，強筋骨，安胎。用于肝腎不足，腰膝酸痛，筋骨無力，頭暈目眩，妊娠漏血，胎動不安；杜仲葉的功能與主治為：補肝腎，強筋骨。用于肝腎不足，頭暈目眩，腰膝酸痛，筋骨痿軟。

杜仲葉含有多種生物活性成分，包括木脂素類、環烯醚萜類、苯丙素類、黃酮類、多糖類等化合物，其中，黃酮類化合物含量較高，如鐘淑娟的分析表明：杜仲皮、葉、雄花、籽的總黃酮平均含量分別為1.33％、9.02％、3.02％和1.22％[鐘淑娟,楊欣,李靜,等.杜仲不同部位總黃酮含量及抗氧化活性研究.中國藥房,2017,28(13):1787-1790]。黃酮類化合物在抗氧化、抑制脂質過氧化反應、預防動脈粥樣硬化及保護心腦血管、防癌、抗癌等方面效果良好，在輔助藥物和保健食品領域都有廣泛的應用。杜仲葉黃酮含量豐富，是提取黃酮的良好原料。

目前，國內有較多的關于杜仲葉總黃酮的提取方法報道，方法主要有水提法、有機溶劑提取法、超聲波或微波輔助提取法、CO₂超臨界萃取法、酶輔助提取法和半仿生提取法等。不同的提取方法有各自的優缺點，總黃酮得率也差異較大。水提法成本低，但總黃酮得率較低；有機溶劑提取法的總黃酮得率有顯著提高，但需要大量有機溶劑；超聲或微波輔助提取法在有機溶劑提取法的基礎上，增加超聲波或微波處理，促進總黃酮溶出，提取得率有一定的提高；CO₂超臨界萃取法可以獲得較高的提取得率和產品純度，但設備要求比較高；酶輔助提取法的提取條件溫和、活性物質不易失活，但商品化的純酶成本較高；半仿生提取法工藝復雜，高溫煎煮容易破壞黃酮的結構。幾種方法相比之下，超聲波輔助溶劑提取有一定的優勢。

為了提高杜仲葉總黃酮的提取得率，本發明對杜仲葉總黃酮超聲波輔助提取工藝進行改進，增加微生物發酵預處理步驟，可以顯著提高杜仲葉總黃酮的提取得率。

(三)發明內容

本發明目的是提供一株新的微生物菌株—氈毛青霉(Penicillium?velutinum)DZ-9-67，及其在杜仲葉總黃酮提取中的應用，能夠顯著提高杜仲葉總黃酮的提取得率。

本發明采用的技術方案是：

本發明提供一株用于杜仲葉總黃酮提取的發酵預處理微生物菌株—氈毛青霉(Penicillium?velutinum)DZ-9-67，保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號：GDMCCNo:61728，保藏日期2021年6月21日，地址：廣東省廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓；郵編510070。