[發明專利]快速檢測金黃色葡萄球菌、沙門氏菌或/和志賀氏菌的LAMP引物及方法

在審

• 申請號: 202110842632.2
• 申請日: 2021-07-26
• 公開（公告）號: CN113462798A
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 徐璇;趙旭歡;呂秀龍;張影;何倩;付詩琪;吉芳英
• 申請（專利權）人: 重慶大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/14;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/445;C12R1/42;C12R1/01
• 代理公司: 重慶華科專利事務所 50123
• 代理人: 吳興偉

1.快速檢測金黃色葡萄球菌、沙門氏菌或/和志賀氏菌的LAMP引物，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1~6、SEQ ID No.19～24或/和SEQ ID No.37～42所示。

2.快速檢測金黃色葡萄球菌、沙門氏菌或/和志賀氏菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1、采用疊氮溴乙錠對樣本進行前處理，用磁珠法提取DNA；

步驟2、向步驟1提取好的DNA樣本中加入LAMP反應體系，所述LAMP反應體系為單重反應體系或三重反應體系，所述單重反應體系包括1套nuc 引物、1套 invA引物或1套ipaH 引物，10×LAMP buffer，dNTPs，Betaine，8U Bst DNA聚合酶， DNA模板，ddH₂O，反應pH為8.8；所述三重反應體系包括1套nuc 引物、1套 invA引物和1套ipaH 引物，10×LAMP buffer，dNTPs，Betaine，8U Bst DNA聚合酶，DNA模板，ddH₂O，反應pH為8.8；1套nuc 引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1~6所示，1套 invA引物核苷酸序列如SEQ ID No. 19～24所示；1套ipaH引物核苷酸序列如SEQ ID No. 37～42所示；

步驟3、將步驟2所得產物進行通過濁度儀進行檢測。

3.如權利要求2所述方法，其特征在于，步驟2中，單重反應體系的反應溫度為65℃。

4.如權利要求2所述方法，其特征在于，步驟2中，單重反應體系中dNTPs 濃度為0.6～1.4mmol/L；

優選的，步驟2中，單重反應體系中dNTPs 濃度為1.0mmol/L。

5.如權利要求2所述方法，其特征在于，步驟2中，單重反應體系中的10×LAMP buffer中Mg²⁺濃度為2～10mmol/L；

優選的，步驟2中，單重反應體系的引物為1套nuc 引物時，Mg²⁺濃度為4～6mmol/L；

優選的，步驟2中，單重反應體系的引物為1套invA 引物時，Mg²⁺濃度為4～8mmol/L；

優選的，步驟2中，單重反應體系的引物為1套ipaH 引物時，Mg²⁺濃度為4mmol/L。

6.如權利要求2所述方法，其特征在于，步驟2中，三重反應體系的反應溫度為60℃。

7.如權利要求2所述方法，其特征在于，具體的，步驟2中，三重反應體系中的10×LAMPbuffer中Mg²⁺濃度2～10mmol/L；

優選的，步驟2中，三重反應體系中的10×LAMP buffer中Mg²⁺濃度4mmol/L。

8.如權利要求2所述方法，其特征在于，步驟2中，三重反應體系中3套引物總濃度為1～3μmol/L；

優選的，步驟2中，三重反應體系中3套引物總濃度為1.5μmol/L。

9.如權利要求2所述方法，其特征在于，步驟2中，三重反應體系中dNTPs 濃度0.6～1.4mmol/L；

優選的，步驟2中，三重反應體系中dNTPs 濃度1.0mmol/L。