[發明專利]基于MRM的植物組蛋白變體H3.3的定量檢測方法

在審

• 申請號: 202110830557.8
• 申請日: 2021-07-22
• 公開（公告）號: CN113567533A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 胡亞君;金紅
• 申請（專利權）人: 上海市口腔醫院（上海市口腔健康中心）
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62;G01N33/68
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 許佳

1.一種基于MRM的植物組蛋白變體H3.3的定量檢測方法，其特征在于，鑒定組蛋白變體H3.3 K27-R40不同形式修飾的肽段，并合成組蛋白變體H3.3 K27-R40不同形式修飾的標準肽段，利用質譜多反應監測技術對所述標準肽段進行質譜定量條件優化，以實現對植物組蛋白變體H3.3 K27-R40不同形式修飾的肽段的定量檢測。

2.如權利要求1所述的基于MRM的組蛋白變體H3.3的定量檢測方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

步驟1：提取植物體內組蛋白，通過組蛋白膠內衍生化反應及酶解，獲取組蛋白H3的不同變體；

步驟2：利用HPLC/MS/MS鑒定組蛋白H3變體H3.3 K27-R40不同形式修飾的肽段，并挑選出可用于質譜多反應監測分析用的肽段樣品；

步驟3：合成組蛋白變體H3.3 K27-R40不同形式修飾的標準肽段，篩選特異的母子離子對；

步驟4：利用質譜多反應監測技術對所述標準肽段進行質譜優化，然后利用優化條件定量檢測植物樣本中組蛋白變體H3.3 K27-R40不同形式修飾的肽段含量。

3.如權利要求2所述的基于MRM的組蛋白變體H3.3的定量檢測方法，其特征在于，步驟3中，母離子選擇的是：響應度好且帶3⁺或4⁺電荷；子離子選擇的是：1)響應度好；2)子離子包含修飾位點(K27和K36)；3)變體之間的子離子無干擾。

4.如權利要求2所述的基于MRM的組蛋白變體H3.3的定量檢測方法，其特征在于，步驟4中，質譜優化包括：特異性母子離子對的篩選以及去簇電壓、碰撞能量的優化。

5.如權利要求1所述的基于MRM的組蛋白變體H3.3的定量檢測方法，其特征在于，組蛋白H3.3 K27-R40不同形式的修飾包括：組蛋白H3.3中第27位賴氨酸和第36位賴氨酸以不含修飾、一甲基化、二甲基化、三甲基化任意兩種形式組合而成。

6.如權利要求1所述的基于MRM的組蛋白變體H3.3的定量檢測方法，其特征在于，還包括線性范圍、重復性、定量檢測限的優化。

7.如權利要求1-6任一項所述的方法在定量檢測植物體內組蛋白H3.3K27-R40不同修飾肽段含量中的應用。