[發(fā)明專利]氯化兩面針堿新納米制劑制備方法和抗肝癌應(yīng)用及驗證方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110829163.0 | 申請日： | 2021-07-22 |
| 公開（公告）號： | CN113633612A | 公開（公告）日： | 2021-11-12 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李丹妮;張旗穎 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣西民族大學(xué) |
| 主分類號： | A61K9/107 | 分類號： | A61K9/107;A61K31/4741;A61K47/22;A61K47/54;A61K47/60;A61K47/69;A61P1/16;A61P35/00;C08G65/333;G01N21/35;G01N21/3577;G01N24/08 |
| 代理公司： | 北京卓嵐智財知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11624 | 代理人： | 任漱晨 |
| 地址： | 530006 廣西壯族自治區(qū)南寧*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 氯化 兩面針 納米 制劑 制備 方法 肝癌 應(yīng)用 驗證 | ||
1.氯化兩面針堿新納米制劑制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
步驟1：將葉酸改性聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯進(jìn)行合成，然后表征；
步驟2：使用葉酸改性聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯修飾氯化兩面針堿納米膠束得到氯化兩面針堿新納米制劑；
步驟3：對氯化兩面針堿新納米制劑進(jìn)行物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)；
步驟4：氯化兩面針堿新納米靶向制劑對肝癌細(xì)胞靶向抗腫瘤能力的評價，制備完成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯化兩面針堿新納米制劑制備方法，其特征在于：所述步驟1的具體過程為：3.8g對甲苯磺酰氯(PTSC中加入20gTPGS在100ml的CH2Cl2溶液中，在室溫下磁力攪拌滴加28mL三乙胺，反應(yīng)12h后，用1mol/mL鹽酸室溫萃取，將無水硫酸鎂加入有機(jī)相中，攪拌、過濾，并在室溫下濃縮，室溫下將冷無水乙醚滴加到冷凝濾液中，將白色沉淀在40℃下干燥，TPGS-PTSC配合物是在40mLN,N-二甲基甲酰胺(DMF)的N2下溶解得到的，然后將乙二胺加入到TPGS-PTSC溶液中，在40℃下劇烈攪拌24小時得到TPGS-NH2配合物；
FA44.14 mg和EDC 17.14mg的等摩爾當(dāng)量溶解在去離子水中，磁力攪拌0.5h，然后滴加等量的NHS 10.36mg的摩爾當(dāng)量，3h后，將活化的FA溶液滴NH2-TPGS 100mg，10mL磷酸鹽緩沖液，pH 7.4溶液中，室溫攪拌3天，然后用MWCO為1000的透析膜用去離子水透析混合物3天，去除多余的反應(yīng)物，最后，將樣品凍干，得到桔黃色的TPGS-FA粉，即為葉酸-聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的氯化兩面針堿新納米制劑制備方法，其特征在于：步驟2的具體過程為：
將TPGS-FA5 mg、NaDC 10.8mg/mL和NC2 mg溶解在pH7.4、0.02M、10mL的磷酸鹽緩沖液中，并在室溫攪拌24h，然后將反應(yīng)復(fù)合物溶液離心，去除游離NC，上清液中冷凍干燥得到TPGS-FA/NC，即為氯化兩面針堿新納米制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的氯化兩面針堿新納米制劑制備方法，其特征在于：所述步驟3中的具體過程為：
先核磁共振光譜和紅外光譜法檢測，1H NMR譜用核磁共振光譜儀檢測，樣品溶解在DMSO中，然后上機(jī)檢測，傅里葉變換紅外光譜檢測方法，樣品以干法溴化鉀粉末的形式進(jìn)行測定；
粒徑、形態(tài)和Zeta電位測定，A-TPGS-NC粒徑和Zeta電位取制備的FA-TPGS-NC用激光粒度測定儀測定其粒徑分布和Zeta電位，在25℃下測定了納米粒子在1μM去離子水中的粒徑和zeta電位，并使用Origin軟件繪制了結(jié)果圖，測量三個獨(dú)立的樣品的尺寸和zeta電位比較TPGS,TPGS-FA/NC,NC，取FA-TPGS氯化兩面針堿納米膠束滴加于銅網(wǎng)上，用濾紙從銅網(wǎng)邊緣吸去多余液體，滴加3％的磷鎢酸溶液進(jìn)行負(fù)染，吸負(fù)染液，自然風(fēng)干，置于透射電鏡下觀察納米膠束的形態(tài)并拍照；
pH敏感環(huán)境氯化兩面針堿釋放測定，F(xiàn)A-TPGS-NC中氯化兩面針堿的pH敏感釋放實(shí)驗分別在pH 5.0和pH 7.4條件下進(jìn)行，稱取5mg FA-TPGS-NC粉末分別溶于5mLPBS溶液，pH為5.0或7.4，置于透析袋中，透析袋置于含有25mL相應(yīng)pH的PBS的50mL離心管中，在37℃恒溫水浴振蕩，在預(yù)設(shè)時間點(diǎn)取樣1mL，預(yù)設(shè)時間點(diǎn)為0分鐘,24分鐘,48分鐘,72分鐘,144分鐘,192分鐘，同時補(bǔ)充相同溫度、相同介質(zhì)1mL，采用上述方法用HPLC在280nm處測定氯化兩面針堿的含量，實(shí)驗平行設(shè)3組，實(shí)驗結(jié)果求平均值。
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