[發明專利]一種多聯檢免疫層析試劑卡以及多聯檢免疫層析檢測方法

有效

• 申請號: 202110828430.2
• 申請日: 2021-07-22
• 公開（公告）號: CN113466450B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 劉召應;巫永勝;佘利民
• 申請（專利權）人: 廣東昊朗醫療科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 肖宇揚

1.一種無需外加參照物的多聯檢層析檢測方法，其特征在于，包括，

加樣步驟，向帶有不同第一檢測信標物質的多種第二抗體中加入待測樣品，得到樣本混合液一，所述樣本混合液中含有由所述第二抗體和目標檢測物結合的抗原抗體復合物一，由此實現所述第一檢測信標物質標記所述目標檢測物，所述第一檢測信標物質為激發波長相同的熒光微球，所述熒光微球包括最大發射波長為450?nm的熒光微球Ⅰ、最大發射波長為510?nm的熒光微球Ⅱ、最大發射波長為540?nm的熒光微球Ⅲ、最大發射波長為570?nm的熒光微球Ⅳ、最大發射波長為630?nm的熒光微球Ⅴ中的至少一種，用于標記不同所述目標檢測物的所述第一檢測信標物質的最大發射波長不同；

層析步驟一，對樣本混合液進行層析操作，使所述樣本混合液一與表面混合固定有多種第一抗體的檢測線接觸，所述第一抗體通過捕獲所述抗原抗體復合物一，以在所述檢測線的表面形成抗原抗體復合物二；

檢測步驟一，檢測所述抗原抗體復合物二中的不同第一檢測信標物質的最大發射波長光信號值；

定量步驟，標定其中一種第一檢測信標物質的最大發射波長光信號值為標準值，將另外的不同第一檢測信標物質的最大發射波長光信號值與所述標準值進行比對，得出待測樣品中的目標物的含量；

在上述步驟中，每種所述第二抗體均與一種所述目標檢測物特異性配對；此外，所述第一檢測信標物質同時滿足激發光波長為300nm-600nm之間、發射光波長為400nm-800nm之間且發射峰的半峰寬均不超過30?nm。

2.如權利要求1所述的多聯檢層析檢測方法，其特征在于，所述檢測步驟一中，檢測器通過更換濾光片或者使用光柵分別檢測各個第一檢測信標物質在對應發射波長下的光信號值。

3.多聯檢免疫層析試劑卡，其特征在于，試劑卡的一端設有加樣區，試劑卡的另一端設有檢測區；試劑卡內設有樣品墊、結合墊、固相載體以及吸水墊，所述樣品墊的一端伸入所述加樣區；所述樣品墊的另一端與結合墊的一端搭接，所述結合墊的另一端與固相載體搭接，所述固相載體的另一端與吸水墊搭接；其特征在于，所述固相載體上設有檢測線；所述檢測線上混合包被有多種第一抗體，所述結合墊上設有多種第二抗體，每種所述第二抗體均與一種目標檢測物特異性配對，每種所述第二抗體上偶聯

用于標記所述目標檢測物的第一檢測信標物質，所述第一檢測信標物質為激發波長相同的熒光微球，所述熒光微球包括最大發射波長為450?nm的熒光微球Ⅰ、最大發射波長為510?nm的熒光微球Ⅱ、最大發射波長為540?nm的熒光微球Ⅲ、最大發射波長為570?nm的熒光微球Ⅳ、最大發射波長為630?nm的熒光微球Ⅴ中的至少一種，用于標記不同所述目標檢測物的所述第一檢測信標物質的最大發射波長不同，此外，所述第一檢測信標物質同時滿足激發光波長為300nm-600nm之間、發射光波長為400nm-800nm之間且發射峰的半峰寬均不超過30?nm；

所述多聯檢免疫層析試劑卡上不設有質控線和參照物，定量時，標定其中一種第一檢測信標物質的最大發射波長光信號值為標準值，將另外的不同第一檢測信標物質的最大發射波長光信號值與所述標準值進行比對，得出待測樣品中的目標物的含量。

4.如權利要求3所述的多聯檢免疫層析試劑卡，其特征在于，所述檢測線上的多個特異性單抗為鼠抗人D二聚體單抗1、鼠抗人心肌肌鈣蛋白I單抗1、鼠抗人肌紅蛋白單抗1、鼠抗人肌酸激酶同工酶單抗1；所述結合墊上的標記單抗為鼠抗人D二聚體單抗2-熒光微球偶聯物、鼠抗人心肌肌鈣蛋白I單抗2-熒光微球偶聯物、鼠抗人肌紅蛋白單抗2-熒光微球偶聯物、鼠抗人肌酸激酶同工酶單抗2-熒光微球偶聯物。

5.如權利要求3所述的多聯檢免疫層析試劑卡，其特征在于，所述第一檢測信標物質的激發光波長為365nm。