[發明專利]一種全基因組整體5hmC檢測方法及其應用

有效

• 申請號: 202110825701.9
• 申請日: 2021-07-21
• 公開（公告）號: CN113637752B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發明（設計）人: 戴宗;于振寧;鄒小勇
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 齊鍵

1.一種5hmC檢測試劑盒，其特征在于，所述5hmC檢測試劑盒中含有用于檢測5hmC的探針，所述探針的核苷酸序列為：?5’-CCGGAGTCCGCTTTCCTCTT-3’；所述探針的5’端連接有點擊化學試劑；所述點擊化學試劑為二苯并環辛炔；所述5hmC檢測試劑盒還含有ddTTP、末端脫氧核苷酸轉移酶TdT、UDP-6-N₃-Glu、T4噬菌體β-葡萄糖基轉移酶T4-βGT、dTTP和金屬納米顆粒試劑；

其中，所述金屬納米顆粒試劑為銅納米顆粒。

2.一種定性檢測基因組中5hmC的方法，包括如下步驟：

（1）取待測基因組DNA，加入ddTTP和末端脫氧核苷酸轉移酶TdT封端，孵育；

（2）滅活TdT，加入UDP-6-N₃-Glu和T4噬菌體β-葡萄糖基轉移酶T4-βGT，孵育；

（3）加入權利要求1中所述的探針；

（4）加入dTTP和TdT，孵育，以獲得poly?T延伸，聚丙烯酰氨凝膠電泳檢測條帶情況；

所述方法為非疾病診斷目的的方法。

3.一種定量檢測基因組中5hmC含量的方法，其特征在于，所述方法基于權利要求2所述的方法，在步驟（4）后，加入銅納米顆粒，檢測熒光強度，帶入標準曲線方程計算5hmC含量；所述方法為非疾病診斷目的的方法。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于，步驟（1）中，每1?μg待測基因組DNA中加入0.5~1?nmol的ddTTP和10~20?U的TdT；

步驟（2）中，所述UDP-6-N₃-Glu的終濃度為0.2~0.5?mM，所述T4-βGT的終濃度為1~?2U/μL；

步驟（3）中，所述探針的終濃度為20~50?μM。

5.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于，步驟（4）中，孵育時間為30~150min。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述銅納米顆粒的終濃度為300~500?μM。

7.權利要求1所述的5hmC檢測試劑盒在檢測5hmC中的應用，所述應用為非疾病診斷目的的應用。