[發明專利]一種測定新生羔羊IgG吸收效率的方法

在審

• 申請號: 202110805622.1
• 申請日: 2021-07-16
• 公開（公告）號: CN113533742A
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 紀守坤;劉月琴;田沛知;嚴慧;張英杰;段春輝;郭云霞
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京中政聯科專利代理事務所(普通合伙) 11489
• 代理人: 何磊

1.一種測定新生羔羊IgG吸收效率的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1、準備牛初乳：獲得牛初乳，于-18℃—-22℃保存；

S2、牛初乳飼喂隨母哺乳羔羊：稱量并記錄羔羊的體重，牛初乳水浴預熱至38℃—40℃，通過口腔灌注給予隨母哺乳羔羊飼喂牛初乳，并確定灌注牛初乳的哺乳量；

S3、血清樣品采集：羔羊飼喂牛初乳后23h—25h，頸靜脈采血，使用促凝采血管收集血液，在室溫下靜置1.5h—2.5h，待血清析出后，在室溫下用離心機以3400×g—3600×g離心14min—16min收集血清樣品，收集的血清樣品置于-18℃—-22℃保存；

S4、牛IgG含量標準曲線測定：牛IgG標準品用10×磷酸鹽緩沖溶液稀釋成0.1mg/ml—1.0mg/ml的多個稀釋度，每個稀釋度至少設兩個重復組；向凝膠瓊脂板的每孔中加入19μl—21μl的標準牛IgG稀釋液，置于36℃-38℃恒溫培養箱，觀察記錄沉淀環的大小，直至其不繼續擴散為止；使用游標卡尺測量各稀釋度沉淀環直徑，取相同稀釋度沉淀環直徑的平均值為測量值，以測量值的平方為橫坐標，凝膠瓊脂板相應孔中牛IgG的含量為縱坐標，繪制標準曲線；

S5、血清樣品IgG含量測定：選擇一新凝膠瓊脂板，每孔加入19μl—21μl稀釋后的血清樣品，每個樣品至少設兩個重復組；使用游標卡尺測量各樣品沉淀環直徑，取相同樣品沉淀環直徑的平均值為測量值，根據標準曲線計算得出的牛IgG含量再乘以血清樣品的稀釋倍數，即為血清樣品IgG的含量；

S6、牛初乳樣品IgG含量測定：選擇一新凝膠瓊脂板，每孔加入19μl—21μl稀釋后的牛初乳樣品，每個樣品至少設兩個重復組；使用游標卡尺測量各樣品沉淀環直徑，取相同樣品沉淀環直徑的平均值為測量值，根據標準曲線計算得出的牛IgG含量再乘牛初乳以樣品的稀釋倍數，即為牛初乳樣品IgG的含量；

S7、新生羔羊IgG吸收效率的計算：IgG表觀吸收率AEA(％)＝[血清牛IgG含量(g/L)*體重(kg)*7.5％]/[牛初乳IgG含量(g/L)*哺乳量(L)]。

2.根據權利要求1所述的一種測定新生羔羊IgG吸收效率的方法，其特征在于：所述S1中，獲得牛初乳為還原牛初乳或新鮮牛初乳，還原牛初乳及新鮮牛初乳獲得方式具體如下：

采用牛初乳粉添加清潔溫水的方式制備的還原牛初乳，且牛初乳粉與清潔溫水的體積比為1:4-1:7；

收集母牛產犢后3天內的乳汁，獲得的新鮮牛初乳。

3.根據權利要求1所述的一種測定新生羔羊IgG吸收效率的方法，其特征在于：所述S2中，灌注牛初乳哺乳量的具體步驟為，將牛初乳預先放入一帶有刻度線的灌注容器，記錄初始牛初乳的體積，灌注牛初乳之后，記錄灌注后牛初乳的體積，兩者的差值即為灌注牛初乳的哺乳量。

4.根據權利要求1所述的一種測定新生羔羊IgG吸收效率的方法，其特征在于：所述S3中，抗凝采血管收集血液的量為4ml-6ml。

5.根據權利要求1所述的一種測定新生羔羊IgG吸收效率的方法，其特征在于：所述S4、所述S5和所述S6中，凝膠瓊脂板的具體制備步驟為：

使用0.9％氯化鈉溶液制備瓊脂濃度為1％凝膠瓊脂板，制備過程中加入兔抗牛IgG抗體，兔抗牛IgG抗體與瓊脂溶液的比例為1:30。

6.根據權利要求1所述的一種測定新生羔羊IgG吸收效率的方法，其特征在于：所述S4中，多個稀釋度具體設置有六個，且六個稀釋度分別為0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml和1.0mg/ml。

7.根據權利要求1所述的一種測定新生羔羊IgG吸收效率的方法，其特征在于：所述S4中，標準曲線采用線形擬合繪制。