[發明專利]一種測定新生羔羊IgG吸收效率的方法

在審

• 申請號: 202110805622.1
• 申請日: 2021-07-16
• 公開（公告）號: CN113533742A
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 紀守坤;劉月琴;田沛知;嚴慧;張英杰;段春輝;郭云霞
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京中政聯科專利代理事務所(普通合伙) 11489
• 代理人: 何磊

本發明公開了一種測定新生羔羊IgG吸收效率的方法，具體包括，準備牛初乳、牛初乳飼喂隨母哺乳羔羊、血清樣品采集、標準牛IgG含量標準曲線測定、血清樣品IgG含量測定、牛初乳樣品IgG含量測定和新生羔羊IgG吸收效率的計算，本發明中，可實現隨母哺乳羔羊正常狀態下IgG吸收效率測定，不影響羔羊正常哺乳和生產管理，突破測定產后時間限制，可測定任意時間羔羊IgG吸收效率。

技術領域

本發明涉及羔羊IgG吸收效率測定技術領域，特別涉及一種測定新生羔羊IgG吸收效率的方法。

背景技術

IgG抗體(immunoglobulin G)在免疫應答中起著激活補體，中和多種毒素的作用。反芻動物IgG抗體不能在妊娠期穿過胎盤，它們從乳腺分泌進入初乳，使新生幼崽第一時間得到抗體保護。

新生羔羊有完整吸收初乳中大分子IgG的能力，從而形成被動免疫力，新生羔羊IgG吸收不足引起的被動免疫失敗將導致羔羊哺乳期免疫力下降，是羔羊哺乳期患病和死亡高發的主要原因。

新生羔羊IgG吸收能力隨出生時間延長而快速下降，一般這種吸收IgG的能力僅有約24h，此后形成腸關閉，同時羔羊對IgG的吸收能力存在巨大的動物個體差異，是影響其被動免疫建立的主要因素，精確測定羔羊IgG吸收效率具有重大生產和科研意義。

前人通常采用延遲初乳飼喂時間進行IgG吸收效率測定，但這種方法存在至少3個問題：1，延遲初乳飼喂導致腸關閉時間延后，所測定的IgG吸收效率不能反映正常狀態；2，由于新生羔羊或犢牛在延遲飼喂的過程中長時間沒有進食，機體本身已經處于虛弱狀態，對試驗結果存在一定程度上的影響；3，新生羔羊初乳飼喂時間無法延遲太久，否則很難保證新生羔羊的存活。

發明內容

(一)要解決的技術問題

本發明可以解決現有羔羊IgG吸收效率測定方法，無法實現羔羊正常狀態下效率測定，測定過程影響正常哺乳和生產管理，且時間限制明顯的難題。

(二)技術方案

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案，一種測定新生羔羊IgG吸收效率的方法，具體包括以下步驟：

S1、準備牛初乳：獲得牛初乳，并于-18℃—-22℃保存；

S2、牛初乳飼喂隨母哺乳羔羊：稱量并記錄羔羊的體重，牛初乳預熱至38℃—40℃，通過口腔灌注給予隨母哺乳羔羊飼喂牛初乳，并確定灌注牛初乳的哺乳量；

S3、血清樣品采集：羔羊飼喂牛初乳后23h—25h，頸靜脈采血，使用促凝采血管收集血液，在室溫下靜置1.5h—2.5h，待血清析出后，在室溫下用離心機以3400×g—3600×g離心14min—16min收集血清樣品，收集的血清樣品置于-18℃—-22℃保存；

S4、牛IgG含量標準曲線測定：牛IgG標準品用10×磷酸鹽緩沖溶液稀釋成0.1mg/ml—1.0mg/ml的多個稀釋度，每個稀釋度至少設兩個重復組；向凝膠瓊脂板的每孔中加入19μl—21μl的標準牛IgG稀釋液，置于36℃-38℃恒溫培養箱，觀察記錄沉淀環的大小，直至其不繼續擴散為止；使用游標卡尺測量各稀釋度沉淀環直徑，取相同稀釋度沉淀環直徑的平均值為測量值，以測量值的平方為橫坐標，凝膠瓊脂板相應孔中牛IgG的含量為縱坐標，繪制標準曲線；

S5、血清樣品IgG含量測定：選擇一新凝膠瓊脂板，每孔加入19μl—21μl稀釋后的血清樣品，每個樣品至少設兩個重復組；使用游標卡尺測量各樣品沉淀環直徑，取相同樣品沉淀環直徑的平均值為測量值，根據標準曲線計算得出的牛IgG含量再乘以血清樣品的稀釋倍數，即為血清樣品IgG的含量；