[發明專利]一組檢測核酸的DNAzyme探針及其應用

有效

• 申請號: 202110799522.2
• 申請日: 2021-07-15
• 公開（公告）號: CN113528511B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 陳俊;黃婷;陳金香;謝寶平;段文軍
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/682
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 齊鍵

1.一組檢測核酸的DNAzyme探針，包含：酶鏈H1、底物鏈H2、酶鏈H3和底物鏈H4；

所述酶鏈H1從5’到3’依次包括：A序列、B序列、C序列、D序列和E序列；

所述E序列與目標核酸互補；

所述D序列為TAG、AAG、ATG、TTG或GCG；

所述C序列為ATAGTGGG、AAAGTGGG、ATAGTGGG、TTAGTGGG或GCAGTGGG；

所述B序列為基于DNAzyme探針對應金屬離子的DNAzyme催化活性中心；

所述A序列與E序列5’端的第2～18位堿基互補；

所述底物鏈H2從5’到3’依次包括：F序列、G序列、H序列、I序列和J序列；

所述F序列為ACCAGCCGCAAAT（SEQ ID NO.13）或ATAGGGTCATGCT（SEQ ID NO.14）；

所述G序列與所述C序列互補；

所述H序列為兩個核糖核苷酸；

所述I序列與所述A序列的3’端互補配對；

所述J序列與所述F序列及G序列的第一位堿基連接而成的序列互補；

所述底物鏈H2的5’端和3’端分別標記有熒光基團和熒光淬滅基團；

所述酶鏈H3從5’到3’依次包括：K序列、B序列、L序列、M序列和N序列；

所述N序列與所述F序列與所述G序列連接而成的序列互補；

所述M序列為TTTAT；

所述L序列與目標核酸的3’端互補；

所述K序列與所述M序列3’端的第1位堿基與所述N序列5’端的第1～16位堿基連接而成的序列互補；

所述底物鏈H4從5’到3’依次包括：O序列、H序列、P序列和Q序列；

所述O序列與所述E序列互補；

所述P序列與所述K序列的3’端互補；

所述Q序列與所述目標核酸的5’端的第1～17位堿基互補；

所述底物鏈H4的5’端和3’端分別標記有熒光基團和熒光淬滅基團；

所述金屬離子為鋅離子、錳離子和銅離子中的至少一種。

2.根據權利要求1所述的檢測核酸的DNAzyme探針，其特征在于：

所述核酸為miR-373，所述金屬離子為鋅離子時，所述酶鏈H1的序列為GCTTCGATTTTGGGGTGTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGGGTAGACACCCCAAAATCGAAGCACTTC（SEQ ID NO.1）；

所述底物鏈H2的序列為ACCAGCCGCAAATCCCACTAT/rA//rG/CACCCCAAGATTTGCGGCTGGT（SEQ ID NO.2）；

所述酶鏈H3的序列為CCGCAAATCCCACTATATCCGAGCCGGTCGAAACACCCCAATTTATATAGTGGGATTTGCGGCTGGT（SEQ ID NO.3）；

所述底物鏈H4的序列為GAAGTGCTTCGATTTTGGGGTGT/rA//rG/TATAGTGGCAAAATCGAAGCACTTC（SEQ ID NO.4）。

3.一種檢測核酸的納米顆粒，包含：

權利要求1～2中任一項所述的DNAzyme探針；和

金屬有機框架材料；

所述金屬有機框架材料中的金屬離子為DNAzyme探針對應金屬離子。

4.根據權利要求3所述的納米顆粒，其特征在于：

所述金屬有機框架材料為ZIF-8、ZIF-90、ZPF-2、Mn-TCPP、Cu-TCPP和NU-110（Cu）中的至少一種。

5.一種檢測核酸的納米顆粒的制備方法，其特征在于：

將權利要求1～2中任一項所述的DNAzyme探針和有機配體混合，加入可溶性金屬鹽，得到納米顆粒；

所述有機配體為硝基咪唑、醛基咪唑、氨基咪唑、2-甲基咪唑、四羧基苯卟啉和苯三甲酸鹽中的至少一種；

所述可溶性金屬鹽為醋酸鋅、硝酸鋅、氯化錳和硝酸銅中的至少一種。

6.一種試劑盒，包含：權利要求1～2中任一項所述的DNAzyme探針和/或權利要求3～4中任一項所述的納米顆粒。