[發明專利]一種鮑氏志賀氏菌免疫膠體金檢測試紙條及其檢測方法

在審

• 申請號: 202110799515.2
• 申請日: 2021-07-15
• 公開（公告）號: CN113552346A
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發明（設計）人: 李斌;吳有雪;吳美嬌;劉程;方水琴;田亞晨;劉濤;楊昊;劉箐
• 申請（專利權）人: 上海理工大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 上海邦德專利代理事務所(普通合伙) 31312
• 代理人: 佘大鵬

本發明提出一種鮑氏志賀氏菌免疫膠體金檢測試紙條及其檢測方法，試紙條自一端至另一端依次設有樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；硝酸纖維素膜上設有質控線和檢測線；檢測線靠近金標墊一端設置，質控線靠近吸水墊一端設置；金標墊上設有與膠體金偶連的單克隆抗體，單克隆抗體由保藏號為D8的雜交瘤細胞株分泌產生；檢測線由保藏號為E8的雜交瘤細胞株分泌產生的單克隆抗體構成；質控線由羊抗鼠抗體構成。本發明的鮑氏志賀氏菌免疫膠體金檢測試紙條，由于采用了可相互配對的單克隆抗體分別噴涂于金標墊和檢測線，對鮑氏志賀氏菌的檢測特異性和靈敏度均較高，具有操作簡便，低成本快速檢測的特點，可實現對大量鮑氏志賀氏菌樣品的現場監控。

技術領域

本發明涉及細菌檢測技術領域，尤其涉及一種鮑氏志賀氏菌免疫膠體金檢測試紙條。

背景技術

鮑氏志賀氏菌是一種革蘭氏陰性短小桿菌，是人類和靈長類動物的腸道致病菌。鮑氏志賀氏菌主要通過糞-口途徑傳播，感染后引發腹痛、腹瀉，嚴重時可能導致神經衰弱等癥狀。該食源性致病菌主要存在于沙拉(蝦、土豆、雞)、生蔬菜、奶類、水果和面包制品中。在食物的生產、加工和運輸中，由于交叉感染，易導致鮑氏志賀氏菌感染事件的大規模爆發。

目前，鮑氏志賀氏菌檢測主要依賴于國標規定的傳統培養法及生化鑒定，其被視為鮑氏志賀氏菌檢測的金標準。但是，該方法檢測耗時，操作繁瑣，不適合大批量樣品檢測。實驗室常用的聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction，PCR)進行鮑氏志賀菌的檢測，其靈敏度高，但需依靠專業的設備和操作人員，耗時長。免疫學檢測由于檢測周期短、操作方便、靈敏度較高，成為近年來發展迅速的檢測手段。但是，我國目前尚未有可用于鮑氏志賀氏菌檢測的快速檢測產品。該專利以鮑氏志賀氏菌為檢測靶標，所要求保護的技術涉及鮑氏志賀氏菌的快速檢測產品。

發明內容

本發明的目的在于提出一種對鮑氏志賀氏菌實現有效檢測，并且靈敏度高，用料節約，經濟性優的鮑氏志賀氏菌免疫膠體金檢測試紙條及其檢測方法。

為達到上述目的，本發明提出一種鮑氏志賀氏菌免疫膠體金檢測試紙條，所述試紙條自一端至另一端依次設有樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；

所述硝酸纖維素膜上設有質控線和檢測線；所述檢測線靠近所述金標墊一端設置，所述質控線靠近所述吸水墊一端設置；

所述金標墊上設有與膠體金偶連的單克隆抗體，所述單克隆抗體由保藏號為D8的雜交瘤細胞株分泌產生；所述檢測線由保藏號為E8的雜交瘤細胞株分泌產生的單克隆抗體構成；所述質控線由羊抗鼠抗體構成。

進一步的，還包括一塊背襯，所述樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水墊均承載于所述背襯上。

根據權利要求1所述的鮑氏志賀氏菌免疫膠體金檢測試紙條，其特征在于，在與膠體金偶連的單克隆抗體中，所述膠體金的粒徑為30～40nm，所述膠體金與單抗的質量體積比為3μg/mL。

進一步的，所述膠體金的最適pH確定如下：

取多組膠體金溶液，每組溶液中加入不同量的0.2mol/L碳酸鉀調整溶液調節所述膠體金溶液的pH，并且加入D8單克隆抗體進行反應，隨后加入10μL10％NaCl溶液持續反應，進行離心操作，離心后觀察到膠體金顏色最紅，無聚沉、無褪色或變色現象的該組膠體金溶液為膠體金的最適pH。

進一步的，D8單克隆抗體與膠體金偶聯的最佳結合量為：

取多組最適pH的膠體金溶液，每一組加入不同量的D8單克隆抗體，反應后，每一組均加入10μL 10％NaCl溶液，取顏色最紅且抗體用量最少的為最小結合量xμg/mL，為保證膠體金完全與抗體結合，以x+x×2為最佳結合量。