[發明專利]基于核苷酸合成測序圖譜的微生物種群鑒定方法及應用

在審

• 申請號: 202110798061.7
• 申請日: 2021-07-15
• 公開（公告）號: CN113403372A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 吳友菊;韋紅;萬逸
• 申請（專利權）人: 海南微氪生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C12Q1/04
• 代理公司: 海口翔翔專利事務有限公司 46001
• 代理人: 莫臻

1.一種基于核苷酸合成測序圖譜的微生物種群鑒定方法，其特征在于，

通過對微生物的目標片段進行三核苷酸和單核苷酸循環的測序反應，得到測序圖譜，根據測序圖譜繪制比色帶，通過分析比色帶或/和測序圖譜確定微生物種類；

所述三核苷酸為dATPαS、dCTP、dTTP、dGTP中的任意三種核苷酸；

所述單核苷酸為不包括在三核苷酸中的另一核苷酸。

2.根據權利要求1所述的基于核苷酸合成測序圖譜的微生物種群鑒定方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

(1)提取微生物的DNA模板，并在聚合酶的作用下PCR擴增部分可變區；

(2)將擴增產物與測序引物結合；

(3)交替循環加入三核苷酸和單核苷酸進行焦磷酸測序，得到測序圖譜；

(4)根據測序圖譜繪制比色帶；

(5)由比色帶或/和測序圖譜分析微生物種群。

3.根據權利要求1所述的基于核苷酸合成測序圖譜的微生物種群鑒定方法，其特征在于，所述測序圖譜包括由核苷酸數目、核苷酸種類、信號強度以及三核苷酸和單核苷酸的位置排布構成的全部信息。

4.根據權利要求1所述的基于核苷酸合成測序圖譜的微生物種群鑒定方法，其特征在于，所述測序圖譜的分析方法包括：

通過分析單核苷酸的位點確定微生物的種類。

5.根據權利要求1所述的基于核苷酸合成測序圖譜的微生物種群鑒定方法，其特征在于，所述比色帶包括依次設置的若干單元，一單元對應一核苷酸位點；所述三核苷酸所占單元位標記為區域A，所述單核苷酸所占單元位標記為區域B。

6.根據權利要求5所述的基于核苷酸合成測序圖譜的微生物種群鑒定方法，其特征在于，比色帶的分析方法包括：

將微生物的比色帶與相似比色帶疊加設置，根據重合程度確定微生物種類。

7.一種基于核苷酸測序圖譜的微生物種群鑒定方法的應用，其特征在于，權利要求1-6任一項所述的微生物種群鑒定方法應用于定向突變位點的測序。