[發明專利]一種鴿新城疫Ⅵb亞型陽性血清標準品及其制備方法

有效

• 申請號: 202110791042.1
• 申請日: 2021-07-13
• 公開（公告）號: CN113376387B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 刁小龍;劉云迎;何海蓉;印廣浩;欒璐;田志偉
• 申請（專利權）人: 中崇信諾生物科技泰州有限公司
• 主分類號: G01N33/96
• 分類號: G01N33/96;G01N33/569
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所(普通合伙) 11305
• 代理人: 鄭明

本發明涉及一種Ⅵb亞型鴿新城疫陽性血清標準品的制備方法。該方法中制備的陽性血清標準品HI效價不低于1:128，中和效價不低于1:1600，血清能夠完全中和Ⅵb亞型鴿新城疫病毒，用于血凝抑制試驗陽性對照標準品和疫苗種毒特異性及外源病毒檢驗，在血凝抑制試驗中能夠保證抗體檢測結果的準確性，充分反映鴿子免疫后的抗體水平，為鴿群中Ⅵb亞型新城疫流行毒株的準確監測、鴿新城疫種毒的免疫原性、特異性檢驗、外源病毒檢驗和疫苗免疫效力評價提供保障。本發明填補了研制Ⅵb亞型鴿新城疫疫苗及流行病學調查無標準陽性血清的空白。該陽性血清的制備包括鴿新城疫LY/2020/Pi株滅活疫苗的制備、動物的篩選、動物免疫程序、陽性血清的制備純化及檢驗。

技術領域

本發明涉及一種鴿新城疫Ⅵb亞型陽性血清標準品及其制備方法，屬于獸用生物制品技術領域。

背景技術

鴿新城疫是由鴿副黏病毒Ⅰ型(pigeon paramyxovirus-1，PPMV-1)引起的流行于鴿群中的一種高度接觸性傳染病，臨床癥狀同雞新城疫相似。該病流行特點為新疫區傳播迅速，發病率100％，死亡率80％以上，老疫區耐過鴿群存在帶毒情況，發病率、死亡率較低，呈散發性。近幾年，隨著我國養鴿業的迅速發展，該病的發生呈上升趨勢，甚至一些養鴿場呈暴發流行，給養鴿業帶來較大的經濟損失。近幾年的流行調查顯示，我國鴿群中流行的鴿新城疫病毒以基因Ⅵb亞型為主，與當前世界上流行的新城疫病毒優勢基因Ⅶ亞型存在抗原性差異，對鴿具有明顯的宿主特異性。

近幾年從鴿群中分離的鴿新城疫毒株與常規雞新城疫疫苗株La Sota株的遺傳距離較遠，它們的核苷酸和氨基酸與新城疫疫苗株La Sota的同源性相對較低，僅為82％～84％；在交叉病毒中和試驗中，基因Ⅵ型的鴿源毒株與La Sota株間的抗原同源性低至65％左右。在交叉血凝抑制試驗中，兩者測定的HI效價相差2～3個滴度。

本發明是通過Ⅵb亞型鴿新城疫毒株LY/2020/Pi株制備的滅活疫苗多次免疫經篩選的陰性鴿后獲得陽性血清標準品。該陽性血清標準品的研制可為鴿群中Ⅵb亞型新城疫流行毒株的準確監測、鴿新城疫種毒的免疫原性評價、特異性檢驗、外源病毒檢驗及疫苗免疫效力評價提供保障，同時可填補研制Ⅵb亞型鴿新城疫疫苗無標準陽性血清的空白。

發明內容

本發明的目的在于通過多次免疫陰性鴿后獲得鴿新城疫的陽性血清標準品，用于Ⅵb亞型鴿新城疫疾病的監測、鴿源新城疫疫苗毒種的免疫原性評價、特異性檢驗、外源病毒檢驗和疫苗免疫效力的評價等。

為了實現上述目的，本發明采取了如下技術方案：

1.一種鴿新城疫Ⅵb亞型陽性血清標準品，其特征在于所述陽性血清標準品是用Ⅵb亞型鴿新城疫病毒LY/2020/Pi株抗原免疫接種健康陰性鴿；

所述的免疫抗原為鴿新城疫病毒Ⅵb亞型毒株LY/2020/Pi株疫苗，其制備方法為：用鴿新城疫病毒Ⅵb亞型毒株LY/2020/Pi株接種SPF雞胚培養，收獲感染雞胚液，經β-丙內酯滅活后，與礦物油佐劑混合乳化制成；

所述鴿新城疫病毒LY/2020/Pi株是由中崇信諾生物科技泰州有限公司分離、提供，該毒株將送交中國科學院微生物研究所中國微生物保藏委員會普通微生物保藏中心保藏，保藏號為：CGMCC No.20289。

2.本發明所述一種鴿新城疫Ⅵb亞型陽性血清標準品的制備方法，包括：

(1)免疫用健康陰性鴿的篩選：

1)選擇飼養管理條件好且滿足以下條件的鴿群：采食、飲水、生長發育均正常，羽毛有光澤，警惕性強，糞便呈螺旋狀，且帶一點白色尿素；無細菌、病毒、寄生蟲等發病史；

2)對試驗鴿逐只采血，檢測血清中新城疫抗體，剔除HI抗體高于1:4者；

3)應用鴿圓環病毒、鴿腺病毒、鴿痘檢測試劑盒逐只檢測各病毒感染情況，剔除陽性或可疑者；