[發(fā)明專利]一種鴿新城疫Ⅵb亞型陽性血清標準品及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110791042.1 | 申請日： | 2021-07-13 |
| 公開（公告）號： | CN113376387B | 公開（公告）日： | 2023-03-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 刁小龍;劉云迎;何海蓉;印廣浩;欒璐;田志偉 | 申請（專利權(quán)）人： | 中崇信諾生物科技泰州有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/96 | 分類號： | G01N33/96;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京君智知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11305 | 代理人： | 鄭明 |
| 地址： | 225316 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 新城 陽性 血清 標準 及其 制備 方法 | ||
1.一種鴿新城疫Ⅵb亞型陽性血清標準品，其特征在于，所述陽性血清標準品是用鴿新城疫病毒Ⅵb亞型毒株疫苗接種健康陰性鴿所制備；
所述鴿新城疫病毒Ⅵb亞型毒株疫苗，其制備方法為：用鴿新城疫病毒Ⅵb亞型毒株LY/2020/Pi株接種SPF雞胚培養(yǎng)，收獲感染雞胚液，經(jīng)β-丙內(nèi)酯滅活后，與礦物油佐劑混合乳化制成；
所述鴿新城疫病毒LY/2020/Pi株已于2021年6月17日送交北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為：CGMCC No.20289。
2.權(quán)利要求1所述一種鴿新城疫Ⅵb亞型陽性血清標準品的制備方法，包括：
(1)免疫用健康陰性鴿的篩選：
1)選擇飼養(yǎng)管理條件好且滿足以下條件的鴿群：采食、飲水、生長發(fā)育均正常，羽毛有光澤，警惕性強，糞便呈螺旋狀，且?guī)б稽c白色尿素；無細菌、病毒、寄生蟲發(fā)病史；
2)對試驗鴿逐只采血，檢測血清中新城疫抗體，剔除HI抗體高于1:4者；
3)應(yīng)用鴿圓環(huán)病毒檢測試劑盒、鴿腺病毒檢測試劑盒、鴿痘檢測試劑盒逐只檢測各病毒感染情況，剔除陽性或可疑者；
4)篩選的試驗鴿隔離觀察一周，健康者可用于制備陽性血清；
(2)免疫抗原的制備：將Ⅵb亞型鴿新城疫病毒LY/2020/Pi株接種10日齡SPF雞胚培養(yǎng)，收獲感染雞胚液，經(jīng)β-丙內(nèi)酯滅活后，與礦物油佐劑混合乳化制成；
(3)免疫程序為：1～2月齡陰性鴿首免，0.5mL/只；兩周后二免，1.0mL/只；再兩周后三免，1.0mL/只；最后一次采血時間為免疫后21～28天；
(4)陽性血清標準品的制備及純化：采集后靜置的鴿血用5000r/min離心10min，收集血清，經(jīng)層析柱純化后，用0.22μm一次性濾器過濾除菌后混合于無菌容器中，分裝保存；
(5)陽性血清標準品檢驗：對制備的陽性血清標準品進行無菌、支原體、外源病毒、特異性檢驗、HI效價及中和效價測定；其中HI效價不低于1:128，中和效價不低于1:1600；同時與雞新城疫抗原進行交叉反應(yīng)實驗，用LY/2020/Pi株抗原和La Sota株抗原分別與陽性血清標準品進行HI試驗，HI效價分別為10.0log2和7.5log2。
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