[發明專利]檢測非洲豬瘟病毒衣殼完整性的PCR引物、探針、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202110790800.8
• 申請日: 2021-07-13
• 公開（公告）號: CN113462817A
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 王印;邵靚;陳弟詩;楊悅;陳斌;張鵬飛;江地科;陳婉婷;涂藤;龐茂楠;羅燕;楊澤曉;姚學萍
• 申請（專利權）人: 四川農業大學;四川省動物疫病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 重慶樂泰知識產權代理事務所(普通合伙) 50221
• 代理人: 鄧鵬

1.檢測非洲豬瘟病毒衣殼完整性的PCR引物和探針，其特征在于：所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述探針的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根據權利要求1所述的檢測非洲豬瘟病毒衣殼完整性的PCR引物和探針，其特征在于：所述的探針3’還含有熒光淬滅劑BHQ1。

3.權利要求1或2所述的檢測非洲豬瘟病毒衣殼完整性的PCR引物和探針在制備檢測非洲豬瘟病毒的試劑盒中的應用。

4.包含權利要求1或2所述的檢測非洲豬瘟病毒衣殼完整性的PCR引物和探針的試劑盒。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括：a、核苷酸序列如SEQID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的探針；b、與核酸結合并具有光敏特性的核酸染料。

6.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：所述的核酸染料為疊氮溴化丙錠。

7.根據權利要求4-6任一項所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒的具體組成為：PMA，2×Pro TaqHS Probe Premix，探針，上游引物，下游引物，模板和無菌水。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒的具體組成為：PMA 200μL，2×Pro TaqHS Probe Premix 12.5μL，10pmol/μL的探針1μL，10pmol/μL的上游引物1.2μL，10pmol/μL的下游引物1.2μL，模板2μL，無菌水7.1μL。

9.權利要求4-8任一項所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

a、取待測樣品，均分為2份，一份進行PMA處理，一份采用無菌水處理；

b、分別提取2份樣品的DNA；

c、對步驟b提取的DNA進行qPCR檢測；

d、qPCR反應結束后，根據兩份核酸樣本熒光定量PCR反應的擴增曲線和循環閾值，快速檢測樣本中非洲豬瘟病毒衣殼完整性。

10.根據權利要求9所述的試劑盒的使用方法，其特征在于：所述qPCR檢測的反應條件為：95℃ 3min，再95℃ 15s，55℃ 30s，后兩步進行40個循環，在退火階段進行熒光信號檢測。