[發(fā)明專利]一種靶向肥大細(xì)胞MrgX2小分子熒光探針及制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110790653.4
• 申請(qǐng)日: 2021-07-13
• 公開（公告）號(hào): CN113402523B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賀懷貞;王程;賀浪沖;侯亞靜;呂悅馨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西安交通大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D487/04
• 分類號(hào): C07D487/04;C09K11/06;G01N33/53;G01N33/74;G01N21/64
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 安彥彥

本發(fā)明公開了一種靶向肥大細(xì)胞MrgX2受體的小分子熒光探針及制備方法和應(yīng)用，所述的靶向肥大細(xì)胞MrgX2受體的小分子熒光探針，是在苯基取代的吡唑并嘧啶類衍生物的苯環(huán)對(duì)位甲氧基側(cè)鏈上，連接上以不同碳鏈長度取代的熒光發(fā)色團(tuán)，所述的熒光發(fā)色團(tuán)為香豆素型、熒光素型或Bodipy FL acid。苯基取代的吡唑并嘧啶類衍生物保持對(duì)MrgX2受體的激動(dòng)活性，而指示性的熒光是由熒光發(fā)色團(tuán)發(fā)出的。本發(fā)明公開的熒光探針既保持了對(duì)MrgX2受體的激動(dòng)活性，又具有一定的熒光性能。作為一種靶向工具分子，可與肥大細(xì)胞細(xì)胞直接作用，通過其熒光性能的變化，來進(jìn)行受體的可視化研究及藥物篩選研究。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于熒光探針技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種靶向肥大細(xì)胞MrgX2小分子熒光探針及制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

藥物過敏反應(yīng)是臨床常見的藥物不良反應(yīng)之一，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致休克或死亡，其中類過敏反應(yīng)占藥物過敏反應(yīng)的70％以上。表達(dá)于肥大細(xì)胞的G蛋白偶聯(lián)受體MrgX2被證實(shí)與類過敏反應(yīng)的發(fā)生密切相關(guān)。多種內(nèi)源性生物活性肽可在機(jī)體內(nèi)激活MrgX2，從而引發(fā)生物體內(nèi)復(fù)雜的生理調(diào)控或過敏性疾病；外源性的一些肽類藥物，小分子藥物，中藥注射液中的組分等在臨床使用中也能通過MrgX2激活肥大細(xì)胞，從而引發(fā)藥物類過敏反應(yīng)，增加臨床應(yīng)用的不良反應(yīng)發(fā)生率。因此，MrgX2及其配體在過敏性疾病及藥物不良反應(yīng)中均具有重要的意義。

在藥物研究中，氣相色譜、液相色譜以及紫外光譜是進(jìn)行藥物分析的基本技術(shù)。20世紀(jì)70年代以來，特別是近年來相繼出現(xiàn)的各種靈敏度高的熒光分析法已有效地用于藥物制劑以及生物體液中藥物的分析。如同步掃描熒光技術(shù)可用于違禁品中苯丙胺和嗎啡加奎寧的測(cè)定；熒光偏振免疫分析法可用于血清中的慶大霉素、地答新、茶葉堿、戊巴比妥、苯巴比妥等多種藥物的檢測(cè)，還可進(jìn)行燒傷患者體內(nèi)萘替米星的藥代動(dòng)力學(xué)研究；特異性熒光偏振免疫法可用來監(jiān)測(cè)腎移植后環(huán)孢素A的全血濃度；熒光猝滅法用來測(cè)定苦參堿和氧化苦參堿的含量；固體表面熒光測(cè)定法用于血清中茶葉堿，以及其它多種抗菌藥、抗氣喘病藥、抗驚風(fēng)病藥等的臨床熒光分析；電解熒光光度法測(cè)定片劑中卡馬西平的含量等等。其中，熒光探針技術(shù)已經(jīng)發(fā)展成為借助熒光顯微鏡在分子水平上進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)的重要手段。這種技術(shù)靈敏度高，可視性強(qiáng)，而且對(duì)研究的生物大分子或細(xì)胞干擾少，因此得到廣泛應(yīng)用。

分子熒光探針對(duì)金屬離子、生物小分子和生物大分子的響應(yīng)，使得人們能夠用熒光顯微鏡、熒光光譜，特別是熒光成像技術(shù)來實(shí)時(shí)檢測(cè)活細(xì)胞內(nèi)分子或離子濃度以及生物大分子結(jié)構(gòu)的變化過程。這些年來，具有熒光性質(zhì)的GPCR配體已經(jīng)廣泛用于定位受體的分布，并能夠?qū)崟r(shí)的監(jiān)測(cè)配體-受體相互作用觸發(fā)的過程(如內(nèi)化、運(yùn)輸、螯合和回收)。因GPCR的配體結(jié)合區(qū)域通常是高粘度低極性的環(huán)境，所以開發(fā)環(huán)境敏感型的GPCR熒光配體則具有更加重要的作用。具有環(huán)境敏感型的熒光配體對(duì)周圍環(huán)境的物理化學(xué)性質(zhì)的變化非常敏感，其在水溶液中顯示弱熒光，但在低極性或當(dāng)結(jié)合到細(xì)胞中的疏水結(jié)構(gòu)域中時(shí)可釋放出明亮的熒光。然而，迄今為止并沒有關(guān)于檢測(cè)MrgX2在細(xì)胞表面分布的小分子熒光探針的報(bào)道。鑒于小分子熒光探針具有高靈敏度、高選擇性以及快速響應(yīng)等有點(diǎn)，迫切需要開發(fā)一種方便的熒光配體來追蹤MrgX2，以深入理解其生理學(xué)和病理學(xué)功能。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的技術(shù)問題在于提供一種靶向肥大細(xì)胞MrgX2小分子熒光探針及制備方法和應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

一種靶向肥大細(xì)胞MrgX2受體的小分子熒光探針，該探針結(jié)構(gòu)式為；

其中，R代表含有羧基的熒光發(fā)色團(tuán)，n代表2～5。

本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)在于，所述的含有羧基的熒光發(fā)色團(tuán)為香豆素類熒光發(fā)色團(tuán)、熒光素類熒光發(fā)色團(tuán)或氟化硼二吡咯醇酸。

本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)在于，香豆素類熒光發(fā)色團(tuán)、熒光素類熒光發(fā)色團(tuán)與氟化硼二吡咯醇酸構(gòu)式如下：