[發(fā)明專利]一種能夠檢測(cè)新冠病毒并同時(shí)鑒別變異體的試劑盒及鑒別方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110789385.4
• 申請(qǐng)日: 2021-07-13
• 公開（公告）號(hào): CN113504376A
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李小平;陳啟;陳夢(mèng)棋;沈雯琪;任艷麗;余銘恩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江樹人學(xué)院（浙江樹人大學(xué)）
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 杭州知見專利代理有限公司 33295
• 代理人: 趙越劍

本發(fā)明公開了一種能夠檢測(cè)新冠病毒并同時(shí)鑒別變異體的試劑盒及鑒別方法，包括采集管、酶解管、緩沖液瓶和用于檢測(cè)新冠病毒并同時(shí)鑒別變異體的標(biāo)準(zhǔn)多肽，所述標(biāo)準(zhǔn)多肽的序列包括以下四條多肽：DIADTTDAVR，DIDDTTDAVR，F(xiàn)DNPVLPFNDGVYFASTEK，F(xiàn)ANPVLPFNDGVYFASTEK。本發(fā)明不但能夠檢測(cè)受試者是否感染新冠病毒，同時(shí)能夠鑒定感染的是否是變異新冠病毒，更方便對(duì)癥治療和進(jìn)行防護(hù)措施。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及新冠病毒檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種能夠檢測(cè)新冠病毒并同時(shí)鑒別變異體的試劑盒及鑒別方法。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)是近百年來人類遭遇的影響范圍最廣的全球性大流行病，對(duì)全世界是一次嚴(yán)重危機(jī)和嚴(yán)峻考驗(yàn)。人類生命安全和健康面臨重大威脅。

新型冠狀病毒肺炎主要由新型冠狀病毒(2019-nCoV)引起，它屬于β屬的冠狀病毒，具有囊膜的單股正鏈RNA病毒，顆粒呈圓形或橢圓形，直徑60-140nm。具有5個(gè)必需基因，分別編碼翻譯核蛋白(N)、病毒包膜(E)、基質(zhì)蛋白(M)和刺突蛋白(S)4種結(jié)構(gòu)蛋白以及RNA依賴性的RNA聚合酶(RdRp)。核蛋白(N)包裹RNA基因組構(gòu)成穩(wěn)定的核衣殼，核衣殼外面圍繞著一層病毒包膜(E)起著保護(hù)作用，在病毒包膜里有基質(zhì)蛋白(M)和刺突蛋白(S)等蛋白。

其中刺突蛋白(S)即能夠結(jié)合細(xì)胞表面血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2而進(jìn)入正常細(xì)胞中。截止2020年12月31日，世界衛(wèi)生組織通報(bào)了四種新變異體，其中傳播最廣泛，危害最大的是在英國(guó)首次發(fā)現(xiàn)的B.1.1.7和在南非首次發(fā)現(xiàn)的501Y.V2。

目前檢測(cè)方法主要是基于基因檢測(cè)的方法。由于新型冠狀病毒是RNA病毒，試劑盒檢測(cè)基本都采用反轉(zhuǎn)錄加實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(RT-PCR)，擴(kuò)增病原體的核酸(RNA)，同時(shí)通過熒光探針實(shí)時(shí)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。該方法能夠檢測(cè)到處于窗口期的患者，及早發(fā)現(xiàn)感染者，是新型冠狀病毒檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。然而，RNA的結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，非常容易降解，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的假陰性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種能夠檢測(cè)新冠病毒并同時(shí)鑒別變異體的試劑盒及鑒別方法，本發(fā)明的試劑盒不但能夠檢測(cè)受試者是否感染新冠病毒，同時(shí)能夠鑒定感染的是否是變異新冠病毒，更方便對(duì)癥治療和進(jìn)行防護(hù)措施。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：

一種能夠檢測(cè)新冠病毒并同時(shí)鑒別變異體的試劑盒，包括采集管、酶解管、緩沖液瓶和用于檢測(cè)新冠病毒并同時(shí)鑒別變異體的標(biāo)準(zhǔn)多肽，所述標(biāo)準(zhǔn)多肽的序列包括以下四條多肽：DIADTTDAVR，DIDDTTDAVR，F(xiàn)DNPVLPFNDGVYFASTEK，F(xiàn)ANPVLPFNDGVYFASTEK。

作為優(yōu)選，所述采集管內(nèi)裝保存液，保存液組成及規(guī)格為：100mmol/l的二硫蘇糖醇溶液和100mmol/l的碳酸氫銨；200μL/管。

作為優(yōu)選，所述酶解管內(nèi)裝凍干粉，制備方法為：配制碘代乙酰胺300mmol/l與堿性胰蛋白酶1mg/ml的混合液，取100μL混合液分裝在EP管中，冷凍干燥。

作為優(yōu)選，所述緩沖液瓶的組成及規(guī)格為：100mmol/l的碳酸氫銨，10ml/瓶。

一種非醫(yī)學(xué)用途的鑒別新冠病毒變異體的方法，包括以下步驟：

(1)試樣保存：將試樣投入含有200μL保存液的采集管中保存；

(2)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)：將采集管在50℃水浴鍋中孵育30分鐘后離心，取上清液100μl加入復(fù)溶后的酶解管中，在37℃水浴鍋中孵育30分鐘后，用5μl甲酸終止反應(yīng)，上機(jī)檢測(cè)，以標(biāo)準(zhǔn)多肽作為陽性對(duì)照與試樣采用相同的上機(jī)檢測(cè)參數(shù)檢測(cè)，所述標(biāo)準(zhǔn)多肽包括以下四條多肽：DIADTTDAVR，DIDDTTDAVR，F(xiàn)DNPVLPFNDGVYFASTEK，F(xiàn)ANPVLPFNDGVYFASTEK；

(3)結(jié)果分析：